Author(s): Melo, Ana Margarida Pereira de
Date: 2009
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10451/3655
Origin: Repositório da Universidade de Lisboa
Subject(s): Lisozima; Fibra amilóide; Interacção lípido-proteína; Medidas de fluorescência resolvidas no tempo; Espectroscopia de correlação de fluorescência; Teses de mestrado - 2009
Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2009
A ligação de várias proteínas amiloidogénicas às membranas lipídicas tem sido crescentemente identificada como constituindo um passo importante no seu mecanismo de agregação e citotoxicidade. Recentemente, o grupo de Kinnunen mostrou que as membranas contendo fosfolípidos aniónicos, nomeadamente, fosfatidilserina (PS), são capazes de desencadear a formação rápida de fibras do tipo amilóide por parte de várias proteínas não amiloidogénicas, tais como o citocrómio c, o lisozima e a mioglobina. Neste trabalho, pretendeu-se elucidar quais os factores que controlam a formação destes agregados supra-moleculares e obter informação adicional sobre a sua estrutura. O lisozima foi seleccionado como proteína modelo e, após a sua derivatização com a sonda fluorescente Alexa Fluor 488 (Alexa488-Lz), estudou-se a sua partição para lipossomas contendo fracções molares variáveis de PS, usando-se a espectroscopia de correlação de fluorescência, tendo-se concluído que esta era dominada por interacções electrostáticas. A interacção do Alexa488-Lz com membranas carregadas negativamente foi depois estudada usando-se várias técnicas de fluorescência (medidas em estado estacionário e resolvidas no tempo) e empregando-se uma gama alargada de concentrações lipídicas. Os resultados obtidos mostraram que esta interacção é um processo bifásico complexo, controlado pela razão molar lípido/ proteína (L/P) usada. Com o aumento da concentração lipídica em solução, há um equilíbrio entre a partição crescente da proteína para as vesículas lipídicas e a sua diluição progressiva na superfície das membranas. À medida que o potencial negativo da superfície das vesículas lipídicas diminui com o aumento da concentração superficial da proteína, a ligação do lisozima aos grupos aniónicos dos fosfolípidos deixa de ser periférica (L/P elevadas e intermédias), ocorrendo uma inserção parcial desta proteína básica no núcleo hidrófobo das membranas (L/P baixas). Concomitantemente, ocorre uma agregação extensiva das vesículas lipídicas mediada pela proteína. Estas alterações no micro-ambiente da proteína poderão preceder a formação de fibras do tipo amilóide pelo lisozima devido à possibilidade de causarem alterações no seu nível de estrutura terciário.
