Aspectos patológicos do mastocitoma cutâneo canino: relação com características epidemiológicas e clínicas e seu valor prognóstico

• Author(s): Oliveira, Justina Maria Prada
• Date: 2008
• Persistent ID: http://hdl.handle.net/10348/112
• Origin: Repositório da UTAD
• Subject(s): Cão; Neoplasias cutâneas; Imunohistoquímicas; Técnicas histológicas
• Document Type: Doctoral thesis
• Language: Portuguese

Description

O mastocitoma canino é uma das neoplasias cutâneas mais frequentes no cão, tendo um comportamento biológico muito variável. A gradação histológica por si só, não prediz o comportamento destes tumores, pelo que a elaboração de novos estudos de prognóstico se reveste de extrema importância. O objectivo fundamental desta tese foi a aquisição de conhecimento actualizado acerca de factores de prognóstico clássicos assim como de novos factores biológicos, que possam fornecer indicações mais precisas acerca do comportamento destes tumores. Foram analisados 90 tumores (31 de grau I, 30 de grau II e 29 de grau III), nos quais foi realizada a caracterização de alguns parâmetros epidemiológicos e clínicos como a raça, o sexo e a idade dos animais, bem como a localização e o tamanho das lesões. Foram utilizados métodos de imunohistoquímica para avaliação da proliferação (Ki-67), da presença de proteínas de membrana (c-Kit), caracterização de componentes da matriz (fibronectina, MMP-1, MMP-2, MMP-9), marcadores de angiogénese (VEGF, CD31), marcadores inflamatórios (Mac 387, CD3, CD79) e presença de quimiocinas eosinofilotácticas (Eotaxina, IL-5 e RANTES). Realizou-se ainda microscopia electrónica de transmissão e imunohistoquímica ultrastrutural (eotaxina). Na análise da ocorrência de recidiva/metástase, por análise univariada, as características epidemiológicas, clínicas e histopatológicas que revelaram associação estatisticamente significativa foram a raça (p=0,049), o tamanho (p=0,021), as mitoses (p=0,005), a ulceração (p=0,003), a infiltração profunda (p=0,002), a quantidade de estroma (p=0,004), as aberrações celulares (p<0,0001), a morfologia do citoplasma (p=0,003) e do núcleo (p=0,002), o grau histológico (p<0,0001) e a metacromasia com azul de toluidina (p<0,0001). Dos marcadores imunohistoquímicos estudados encontramos associação com o Ki-67 (p<0,0001), o Mac 387 (p=0,003), a fibronectina do estroma (p=0,009), a MMP-9 (p=0,016) e o c-Kit (p<0,0001). A análise multivariada revelou o grau histológico como a melhor variável independente para predizer a ocorrência de recidiva/metástase para um primeiro nível de análise. Num segundo nível de análise, o c-Kit foi decisivo para predizer a evolução dos tumores de grau III e a IL-5 para os tumores de grau I e de grau II. Na análise da morte devida ao tumor, as características epidemiológicas, clínicas e histopatológicas que mostraram associação significativa foram a raça (p=0,005), o tamanho (p<0,0001), as mitoses (p=0,016), a ulceração (p<0,0001), a actividade juncional (p=0,035), a infiltração profunda (p<0,0001), a quantidade de estroma (p<0,0001), a degradação do colagénio (p=0,001), as aberrações (p<0,0001), a morfologia do citoplasma (p<0,0001) e do núcleo (p=0,001), o grau histológico (p<0,0001) e a metacromasia com azul de toluidina (p<0,0001). Dos marcadores imunohistoquímicos estudados encontramos associação com o Ki-67 (p<0,0001), o Mac 387 (p<0,0001), a fibronectina do estroma (p=0,022), a MMP-9 (p<0,0001) e o c-Kit (p<0,0001). A análise multivariada revelou o grau histológico e o Ki-67 como as melhores variáveis independente para predizer a ocorrência de morte devida ao tumor, para um primeiro nível de análise. Num segundo nível de análise, o c-Kit e a ulceração surgiram como os melhores factores para predizer a evolução dos tumores de grau III. Nos tumores de grau I e de grau II, a MMP-9 mostrou-se preditiva da evolução, tendo particular importância nos tumores de grau I. O presente estudo demonstra a importância da gradação histológica, da marcação do c-Kit e do índice proliferativo no prognóstico dos mastocitomas. Dentro das características histopatológicas, a ulceração surge também como um factor de prognóstico independente. O estudo da imunorreactividade para as MMPs revelou que a MMP-9 está implicada no processo metastático. A expressão desta MMP está aumentada no grupo de mastocitomas de elevada agressividade, surgindo assim como um bom indicador de prognóstico.

Mast cell tumors are among the most common cutaneous neoplasms in dogs, having a highly variable biological behavior. Histological gradation does not totally predict the behavior of these tumors, for which new prognostic studies are important. The aim of this research was the acquisition of up-to-date knowledge about some classic prognostic factors as well as new biological factors, which will be able to bring more accurate data about the behavior of these tumors. The characterization of some epidemiological and clinical parameters was carried out in a series of 90 tumors (31 grade I, 30 grade II, 29 grade III). Race, sex and age of the animals, as well as location and size of the lesions were recorded. Immunohistochemistry methods were used to evaluate proliferation (Ki-67), presence of membrane proteins (c-Kit), characterization of matrix components (fibronectin, MMP- 1, MMP-2, MMP-9), angiogenic markers (VEGF, CD31), inflammatory markers (Mac 387, CD3, CD79), and eosinophylotactic chemokines (Eotaxin, IL-5 and RANTES). Transmission electron microscopy was carried out, as well as immunoelectron for eotaxin. Univariate analysis for local recurrence/metastasis revealed significant statistical association with race (p=0,049), size (p=0,021), mitosis (p=0,005), ulceration (p=0,003), deep infiltration (p=0,002), amount of stroma (p=0,004), cellular aberrations (p<0,0001), cytoplasm morphology (p=0,003), nuclear morphology (p=0,002), histological degree (p<0,0001), toluidine blue metachromasia (p<0,0001), Ki-67 (p<0,0001), Mac 387 (p=0,003), stromal fibronectin (p=0,009), MMP-9 (p=0,016), and c-kit (p<0,0001). The multivariate analysis revealed histological degree as the best independent variable to predict recurrence/metastasis in a first level of analysis. A second level of analysis revealed c-Kit as the best prognostic marker for grade III tumors and IL-5 for grade I and grade II tumors. Regarding tumor related death, the parameters that showed significant statistical association were race (p=0,005), size (p<0,0001), mitosis (p=0,016), ulceration (p<0,0001), junctional activity (p=0,035), deep infiltration (p<0,0001), amount of stroma (p<0,0001), collagen degradation (p=0,001), cellular aberrations (p<0,0001), cytoplasm morphology (p<0,0001), nuclear morphology (p=0,001), toluidine blue metachromasia (p<0,0001), Ki-67 (p<0,0001), Mac 387 (p<0,0001), stromal fibronectin (p=0,022), MMP-9 (p<0,0001), and c-Kit (p<0,0001). Multivariate analysis revealed histological degree and Ki-67 as the best independent prognostic variables to predict tumor related death in a first level of analysis. A second level of analysis revealed c-Kit and ulceration as the best prognostic markers for grade III tumors and MMP-9 for grade I and grade II tumors. The present study demonstrates the importance of histological grading, c-Kit immunostaining, and proliferation rate as prognostic markers in mast cell tumor, as well as ulceration. MMP immunoreactivity was demonstrated in neoplastic mast cells and the results suggests that MMP-9 is the major gelatinase in the invasive process of canine mastocytoma.