Author(s): Marques, Diane Raphaela
Date: 2010
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10773/3147
Origin: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Subject(s): Métodos biomoleculares; Células dendríticas; Fosfolípidos; Espectrometria de massa
Os fosfolípidos são os principais componentes das membranas celulares e têm um papel muito importante na estrutura e sinalização dos sistemas biológicos. A importância biológica dos fosfolípidos levou a um crescente interesse na caracterização do perfil lipídico de amostras biológicas e avaliação da sua variação em diferentes condições fisiológicas. A lipidómica é uma metodologia que engloba métodos separativos, como a cromatografia de camada fina ou cromatografia líquida de alta pressão, em associação com a espectrometria de massa, para obter informação sobre o perfil lipídico de células ou tecidos. Esta metodologia permite a identificação dos constituintes das diferentes classes dos fosfolípidos As Células Dendríticas (DC) são células do sistema imunitário, capazes de capturar, processar e apresentar antigénios aos linfócitos T, tendo assim um papel essencial na iniciação e modulação da resposta imunitária. O reconhecimento dos antigénios, tal como alergénios e patogénios, pelas células dendríticas conduz á maturação das mesmas. As citocinas/quimiocinas são um dos principais mediadores na imunização mediada por DC, e mais recentemente tem-se tornado evidente que os mediadores lipídicos também desempenham um papel importante neste processo de imunização. O objectivo deste trabalho consiste na identificação do perfil lipídico das células dendríticas imaturas e maduras, quando expostas a agentes que induzem à maturação das DC, nomeadamente lipopolissacarídeo (LPS) e alergénios de contacto, ou ainda quando expostas a irritantes, incapazes de activar o processo de maturação das DC. Inicialmente as diferentes classes de fosfolípidos presentes no extracto lipídico total foram separadas por TLC e posteriormente analisadas por ESI-MS e caracterizadas por espectrometria de massa tandem (ESI-MS/MS), permitindo assim identificar os detalhes estruturais e a composição dos fosfolípidos. A maioria dos fosfolípidos identificadas nos extractos de DC incluem fosfatidilcolinas (PC), fosfatidiletanolaminas (PE), fosfatidilinositois (PI), fosfatidilserinas (PS), fosfatidilglicerol (PG), esfingomielinas (SM) e ceramidas (Cer). Os resultados obtidos permitiram observar que estimulação das DCs por LPS e com químicos indutores de dermatite de contacto altera de um modo significativo, o perfil lipidómico das DCs, essencialmente o perfil lipídico das classes das esfingomielinas e das ceramidas. ABSTRACT: Phospholipids (PLs) are the main components of cell membranes and play important roles in signalling in biological systems. The importance of PLs has led to an increase interest in the evaluation of the lipid profile from biological samples, trying to understand there variation in spite of the different physiological conditions. Lipidomics is a methodology encompasses separation methods such as thin layer chromatography or high pressure liquid chromatography in combination with mass spectrometry to obtain information on the lipid profile of cells or tissues. This methodology allows the identification of the constituents of different classes of phospholipids. Dendritic cells (DC) are immune cells, able to capture, process and present antigens to T lymphocytes, thus playing a crucial role in initiation and modulation of immune response. Recognition of antigens, such as allergens and pathogen-associated molecular patterns, by dendritic cells (DCs) leads to DC maturation. It is being considered that besides cytokines/chemokines, lipid mediators may also have effects on the immunogenicity of DCs. The aim of this study is to identify the profile of phospholipids in immature and mature dendritic cells and evaluate the changes that occur in PL profile of DC induced by the presence of LPS and skin allergens that trigger DC maturation. Different PL classes from lipid extract were initially separated by TLC and further analysed by ESI-MS and characterized by tandem mass spectrometry (ESI-MS / MS), allowing the identification of the detailed structure of PLs. Main PLs identified in DC extracts included phosphatidylcholines (PC), phosphatidylethanolamines (PE), phosphatidylinositols (PI), phosphatidylserines (PS), phosphatidylglycerol (PG), sphingomyelin (SM) and small amounts of ceramides (Cer). Generally the DCs stimulation with LPS and allergens, changes significantly the DCs lipidomics profile, from sphingomyelin and ceramides.
