Author(s): FIGUEIRA, Ana Rita Pinheiro de Sousa
Date: 2012
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10362/19146
Origin: Repositório Institucional da UNL
Subject(s): Microbiologia médica; Ciências biomédicas; Praziquantel; Polimorfismo; RAPD-PCR; Resistência; Schistosoma mansoni; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas
A Schistosomose é uma doença parasitária, transmitida por parasitas da classe Trematoda, do género Schistosoma. A doença afecta cerca de 207 milhões de pessoas em todo o mundo, sendo em particular as crianças e as mulheres as mais vulneráveis à infecção. A cronicidade desta doença tornou-se um importante problema de Saúde Pública a nível mundial, afectando as actividades diárias do homem e consequentemente o crescimento económico dos países em vias de desenvolvimento. A identificação e caracterização de marcadores moleculares que possam estar envolvidos no processo de fenótipo de resistência a fármacos em qualquer das fases do ciclo de desenvolvimento parasitário constituem um importante desafio para a melhoria do tratamento farmacológico e controlo da Schistosomose. Este estudo tem como objectivo contribuir para a distinção através da técnica de RAPD-PCR de possíveis polimorfismos existentes entre cercárias produzidas a partir de moluscos infectados com miracídio obtidos de vermes adultos fenotipicamente sensíveis ou resistentes ao Praziquantel. A utilização da técnica de biologia molecular RAPD-PCR permitiu identificar e analisar a existência de bandas polimórficas através da comparação dos padrões de bandas obtidos em gel de poliacrilamida a 6% representantes de amplificação do DNA, extraído de cercárias produzidas a partir de moluscos infectados com miracídios obtidos de vermes adultos sensíveis ou resistentes ao Praziquantel utilizando vários primers distintos. Foram utilizados 7 primers, previamente descritos por Tsai et al (2000), como tendo uma boa eficácia na amplificação de amostras de DNA de Schistosoma mansoni tendo alguns deles a particularidade de darem origem a padrões diferenciados nas bandas obtidas após electroforese de DNA de cercárias obtidas para os ensaios de resistência e sensibilidade ao fármaco Praziquantel. Os resultados obtidos, ainda que preliminares, indicam já uma variação genética entre os dois ensaios de resistência e sensibilidade ao Praziquantel.
Schistosomiasis is a parasitic disease, caused by a Tramatode species of the Schistosoma genus. This disease affects approximately 207 million people worldwide, especially women and children, who are most vulnerable to the infection. The chronicity of this disease not only became an important international Public Health issue but also affects the daily activities of humankind and, consequently, the economic growth of developing countries. The identification and characterization of molecular markers, which may be part of the drug-resistant phenotype process in any stage of the parasite development cycle, are an important challenge for the improvement of the pharmacological treatment and control of Schistosomiasis. Hence, the object of this dissertation is to use the RAPD-PCR technique to distinguish potential different polymorphisms among cercariae produced from miracidium-infected molluscs obtained from adult worms that are susceptible or resistant to Praziquantel. The use of this RAPD-PCR molecular biology technique allowed identifying and analysing the existence of polymorphic bands through the comparison of the band patterns obtained through 6% polyacrylamide gel representing DNA amplification extracted from cercariae produced from molluscs infected with miracidium from adult worms that are susceptible or resistant to Praziquantel, using different primers. Seven primers were used, which were previously described by Tsai et al (2000) as being highly efficient in the amplification of Schistosoma mansoni DNA samples, some with the particularity of creating different band patterns in the bands obtained after DNA Electrophoresis of cercariae obtained for the Praziquantel resistance and susceptibility tests. Despite being preliminary, the results achieved show a genetic variation between both the Praziquantel resistance and susceptibility tests.
