Author(s): MOIANE, Idalécia Laurinda Carlos Cossa
Date: 2012
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10362/19163
Origin: Repositório Institucional da UNL
Subject(s): RAPD; Susceptibilidade; Polimorfismo; Parasitologia médica; Parasitas; Infeções; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas
A schistosomose é a segunda parasitose com maior impacto na Saúde Pública afectando mais de 200 milhões de pessoas que vivem em países subdesenvolvidos das regiões tropicais e subtropicais, sendo que 85% vivem em África. Trata-se de um complexo de infecções parasitárias crónicas e agudas, causadas por parasitas do género Schistosoma, sendo este grupo de parasitas habitantes dos vasos sanguíneos de mamíferos cuja distribuição geográfica e diversidade é superior a outros parasitas habitantes dos vasos sanguíneos. Os parasitas causadores desta patologia, em particular a espécie Schistosoma mansoni, têm a capacidade de criar mecanismos de escape ao sistema imunológico do hospedeiro, o que leva a variações no seu perfil genético conforme o ambiente a que estejam expostos, implicando variabilidade genética evidenciada através de polimorfismos genéticos. Assim sendo, efectuou-se o presente estudo com o objectivo de efectuar uma análise genética de estirpes de S. mansoni, com diferente susceptibilidade à infecção no hospedeiro definitivo através da técnica molecular RAPD-PCR. Para o efeito foram testados 10 marcadores RAPD, os dos quais apenas os OPI-7, OPI-12 e OPI-18 se mostraram mais eficientes para a análise de polimorfismos. Os vermes foram obtidos de murganhos normais Mus musculus, estirpe CD1, ER e a estirpe C57BL/6J dos quais foram obtidos os transgénicos Jα18−/− e TGFβRIIdn (com deficiência em células iNKT e silenciamento dos receptores para TGF-β respectivamente). Cerca de 40% (4/10) dos primers, demonstraram um perfil genético diferente, tendo sido gerados um total de aproximadamente 437 fragmentos e um padrão de amplificação com fragmentos cujos pesos moleculares variaram entre os 200pb e os 2000pb. Ao comparar os perfis RAPD de vermes obtidos do murganho CD1 com os demais, observou-se que este distinguiu-se dos vermes obtidos de C57BL/6J, Jα18−/− e TGFβRIIdn pela presença de três, um e seis fragmentos diferentes respectivamente. A análise de dendrograma demonstrou a existência de três agrupamentos distintos, o primeiro composto por vermes obtidos do murganho CD1 (apenas o verme fêmea), ambos sexos obtidos de murganhos da estirpe ER, C57BL/6J e Jα18−/−; o segundo composto pela fêmea e macho de vermes de S. mansoni obtidos de murganhos TGFβRIIdn e o terceiro obtidos de murganhos CD1 (apenas o macho). ix A análise dos perfis RAPD, mostrou-se útil como ferramenta para estudo de perfis genéticos de vermes de S. mansoni infectando hospedeiros definitivos com diferente padrão genético. Por outro lado, os perfis polimórficos identificados no presente estudo sugerem que o sistema imune do hospedeiro é capaz de induzir à pressão selectiva do parasita o qual pode ser observado através da análise de polimorfismos.
The schistosomiasis is the second largest parasitic disease with impact on public health affecting more than 200 million people living in underdeveloped countries of tropical and subtropical regions, where 85% live in Africa. Is a complex of acute and chronic parasitic infections, caused by parasites of the genus Schistosoma, group of parasites population whose habitat is the blood vascular system of mammals has higher geographical distribution and diversity than other parasite population of blood vascular system. The parasites causing this disease, in particular Schistosoma mansoni, can create escape mechanisms to the host immune system, leading to variations in their DNA profile to the environment as they are exposed, resulting in genetic variability evidenced by genetic polymorphisms. The aim of this study was to assess whether different susceptibility to infection in definitive hosts, can produce genetic polymorphic profiles using a RAPD-PCR. For this purpose 10 primers were used for RAPD-PCR screening, of them, one, OPI-5 was not functional and the OPI-7, OPI-12 and OPI-18 where more efficient for the analysis of polymorphisms. Worms were collected from Mus musculus strain CD1, resistant and non-resistant to Praziquantel (strain BH) and from C57BL/6J, Jα18-/-, TGFβRIIdn mice both infected with S. mansoni (strain BH). Worms were collected and genomic DNA was extracted from each corresponding mice strain. About 40% (4/10) of the RAPD-PCR primers used presented different genetic profiles, generating 437 fragments and pattern amplifications whose molecular weights were between 200pb and 2000pb. For S. mansoni infecting C57BL/6J mice, the RAPD-PCR profile showed three different bands from the S. mansoni infecting CD1 mice profile. For S. mansoni infecting Jα18−/− mice the RAPD-PCR profile showed one different band from the S. mansoni infecting CD1 mice profile. For S. mansoni infecting TGFβRIIdn mice the RAPD-PCR profile showed six different bands from the S. mansoni infecting CD1 mice profile. The genetic similarity analysis, demonstrate the existence of three distinct clusters, one with S. mansoni infecting CD1 (only a female), female and male infecting ER, C57BL/6J and Jα18-/-; second cluster with female and male of S. mansoni infecting a TGFβRIIdn mice and third male infecting a CD1 mice. The RAPD-PCR analyzes, showed to be a very useful toll in genetic profiling S. mansoni infecting hosts with different genetic backgrounds and polymorphic profiles identified in this study suggest that the host immune system induce a selective pressure on the parasite genetic profile.
