Regucalcin regulation by extracellular calcium in prostate cells

• Author(s): Rodrigues, Daniel Barreira
• Date: 2012
• Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.6/1117
• Origin: uBibliorum
• Subject(s): Cancro da próstata; Regucalcina; Cancro da próstata - Cálcio; Receptor sensível do cálcio
• Document Type: Master thesis
• Language: English
• Advisor(s): Baptista, Cláudio Jorge Maia; Socorro, Sílvia Cristina da Cruz Marques
• Contributor(s): uBibliorum

Description

Prostate cancer is one of the most diagnosed diseases in men at the present time. It is well known that changes in calcium (Ca2+) homeostasis are derived from modifications in Ca2+ regulating elements. Regucalcin (RGN) is a Ca2+-binding protein which plays an important role in maintenance of intracellular Ca2+ homeostasis and regulation of apoptosis and proliferation. RGN is underexpressed in prostate cancer cells, suggesting that a loss of RGN expression may be associated with tumor development. In vivo studies have also shown that Ca2+ administration acts as a regulator of RGN expression in liver and kidney tissues. However, no studies on the characterization of RGN regulation by extracelular Ca2+ in prostate cells have been conducted. To attain this goal, prostate cells were stimulated with different doses of CaCl2 during several periods of time. To assess RGN mRNA and protein expression, Real Time PCR and Western Blot were carried out, respectively. Moreover, the cell viability in response to treatments was evaluated through MTS assays. Our results show that nonneoplastic PNT1A cells present higher levels of RGN when compared to neoplastic LNCaP or PC3 cells. We also verified that RGN expression in PNT1A cells is up-regulated by extracellular Ca2+ at 1,5h after stimuli, but its expression decreases after 3h of stimulation. We also showed that high doses of extracellular Ca2+ induce different effects on cell proliferation between PNT1A and LNCaP cells. This study led us to conclude that RGN appears to be regulated by extracellular Ca2+ levels in prostate cells and that an elevation of extracellular Ca2+ promotes high rates of cell proliferation in LNCaP cells, possibly due to the down-regulation in RGN expression in cancer cells.

O cancro da próstata é de umas das doenças mais diagnosticadas em homens de países Ocidentais. É sabido que as alterações na homeostase do cálcio (Ca2+) derivam de modificações ao nível dos elementos reguladores do Ca2+ . A regucalcina (RGN) é uma proteína de ligação ao Ca2+ que desempenha um papel importante ao nível da manutenção da homeostase do Ca2+ intracelular, tal como na regulação da apoptose e da proliferação. A RGN é sub-expressa em células do cancro da próstata, sugerindo que a perda de expressão da RGN poderá estar associada com o desenvolvimento tumoral. Estudos in vivo mostram que a administração de Ca2+ actua como um regulador da expressão de RGN em fígado e de rim de rato. No entanto, ainda nenhum estudo acerca da caracterização da regulação da RGN pelo Ca2+ extracelular foi conduzido em células de próstata. Para atingir este objectivo, células da próstata foram estimuladas com diferentes doses de CaCl2 durante vários períodos de tempo. Para avaliar a expressão do mRNA e da proteína, estudos de Real Time PCR e de Western Blot foram efectuados, respectivamente. A viabilidade celular em resposta aos diferentes tratamentos foi avaliada através de ensaios de MTS. Os nossos resultados mostram que células não neoplásicas PNT1A apresentam níveis elevados de RGN quando comparados com células neoplásicas LNCaP e PC3. Também verificamos que a expressão de RGN em células PNT1A é regulada positivamente pelo Ca2+ extracelular às 1,5h de estímulo, sendo que a sua expressão começa a diminuir após as 3h. Mostramos ainda que elevadas doses de Ca2+ extracelular induzem diferentes efeitos ao nível da proliferação entre as células PNT1A e LNCaP. Este estudo levou-nos a concluir que a RGN aparenta ser regulada através do Ca2+ extracelular em células da próstata e que uma elevação nos níveis de Ca2+ extracelular poderá promover elevadas taxas de proliferação em células LNCaP, possivelmente devido a sub-expressão de RGN verificada em células tumorais.