Author(s): Rodrigues, Rita Vaz
Date: 2016
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.5/11840
Origin: Repositório da UTL
Subject(s): cão; músculo estriado; fibras musculares; histoquímica; imunohistoquímica; doenças musculares; dog; striated muscle; muscle fibers; histochemistry; immunohistochemistry; muscular diseases
Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
As técnicas histoquímicas permitem melhorar o conhecimento sobre o tecido muscular e suas alterações patológicas e, juntamente com as técnicas imunohistoquímicas, têm papel importante no diagnóstico de doenças musculares. Assim, o presente trabalho teve como objetivos, em primeiro lugar, caracterizar o tecido muscular esquelético da espécie canina, tanto a nível histoquímico como imunohistoquímico, incidindo, sobretudo, na tipificação e subtipificação das fibras musculares e avaliação das suas percentagens relativas. Em segundo lugar, pretendeu-se verificar a potencial aplicação de técnicas imunohistoquímicas no diagnóstico, aplicando-as em músculos alterados. As técnicas histoquímicas realizadas foram: adenosina trifosfatase ácido resistente (ATPase 4,6), adenosina trifosfatase alcalina (ATPase 9,4) e desidrogenase tetrazolium redutase do ácido nicotínico (NADH diaforase). Estas foram efetuadas em cortes de congelação dos músculos temporal, masséter, diafragma e bicípede femoral de dois canídeos eutanasiados sem história de doença muscular. Os mesmos músculos destes canídeos foram também submetidos a imunohistoquímica, recorrendo aos anticorpos MHC-slow e MHC-fast. Posteriormente, estes anticorpos foram aplicados em três biópsias musculares de canídeos previamente diagnosticados com doença muscular. Dos resultados obtidos pela histoquímica foi possível diferenciar fibras de tipo I e II, subtipificar as fibras tipo II e obter a percentagem de fibras tipo I e II nos diferentes músculos. Com a imunohistoquímica, registou-se a percentagem de células marcadas pelos anticorpos atrás referidos e a intensidade de cada marcação, consoante o músculo ou o caso clínico em questão. Não foi possível observar a existência de correlação entre as fibras de tipo I e II marcadas pela histoquímica e a marcação obtida por imunohistoquímica, não existindo igualmente correlação entre as percentagens de fibras marcadas pelos dois tipos de técnicas. Finalmente, foram também identificadas as condições necessárias e suficientes para a realização das técnicas de diagnóstico de patologia muscular no Laboratório de Anatomia Patológica da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Lisboa (FMV-ULisboa), reconhecendo-se as limitações e a forma de as ultrapassar.
ABSTRACT - Optimization of the Characterization of Striated Muscle Fibers in Dog (Canis familiaris) by Histochemistry and Immunohistochemistry with Possible Application in the Diagnosis. - Histochemical techniques are able to increase the comprehension regarding normal and diseased muscular tissue and, together with immunohistochemical techniques, they have an important role in the diagnosis of muscular diseases. Therefore, the present work aimed, primarily, to characterize dog’s musculoskeletal tissue, at the histochemical and immunohistochemical level, focusing, essentially, on the typification and subtypification of muscle fibers. Secondly, it was intended to apply immunohistochemical techniques to altered muscle tissue, in order to determine if these techniques can be used in the diagnosis of dog muscular diseases. The following histochemical techniques were performed: adenosine triphosphatase at pH 4.6 (ATPase 4.6), adenosine triphosphatase at pH 9.4 (ATPase 9.4) and reduced nicotinamide adenine dinucleotide-tetrazolium redutase (NADH diaphorase). These techniques were performed in frozen sections of the temporalis, masseter, diaphragm and biceps femoris muscles that belonged to two dogs euthanized with no history of muscular disease. The same muscles were also submitted to immunohistochemical techniques, using the antibodies MHC-slow and MHC-fast. These antibodies were also applied to muscle biopsies of three dogs diagnosed with muscular disease. Histochemistry made possible to differentiate type I and II fibers, to identify the subtypes of type II fibers and to determine the percentage of type I and II fibers in the different muscles. Immunohistochemistry, made possible to determine the percentage of marked cells by both antibodies. The intensity of stain was registered according to the muscle or the clinical case analyzed. However, it was not possible to obtain any correlation between the percentage of type I and II fibers marked by histochemistry and by immunohistochemistry or no correlation was found between the percentages of muscle fibers marked by both techniques. Finally, the present study also allowed the identification of the conditions necessary and sufficient to perform these techniques in the diagnosis of muscle pathology to be put up in the Laboratory of Anatomical Pathology of the Faculty of Veterinary Medicine (University of Lisbon), recognizing its limitations and how to overcome them.
