O cromossoma Y é especificamente masculino, haploide e transmitido de pai para filho sem alterações, a menos que tenham ocorrido mutações A maior vantagem do estudo dos STRs do cromossoma Y, em contraste com os STRs autossómicos é a amplificação selectiva do ADN masculino. Os STRs do cromossoma Y têm propriedades de utilidade forense especialmente quando aplicados em vestígios biológicos provenientes de casos de agressão sexual, em que um suspeito masculino está envolvido, o que acontece praticamente na totalidade dos casos. Diversas metodologias são aplicadas desde há longa data no estudo de vestígios biológicos provenientes de agressões sexuais, como a pesquisa de espermatozóides, a pesquisa de esperma pela reacção de Fosfatase Ácida e o estudo do gene homólogo da Amelogenina Da amplificação desta região dos cromossomas sexuais resultam fragmentos com 106 pb do cromossoma X e 112 pb do cromossoma Y, mas, se o material biológico feminino estiver em muito maior quantidade que o masculino, ao realizar o estudo da Amelogenina pode ser difícil detectar o cromossoma Y. Neste estudo com aplicação do Powerplex® Y System detecta se de forma inequívoca a presença de material genético de origem masculina, obtendo se um perfil genético ou haplotipo que poderá ser comparado com o dos suspeitos. Este kit está comercialmente disponível e validado e permite a amplificação simultânea de 12 Y STRs DYS 19 DYS 385 a/b, DYS 389 I, DYS 389 II, DYS 390 DYS 391 DYS 392 DYS 393 DYS 437 DYS 438 DYS 439.Nos casos de agressão sexual, o ADN autossómico do agressor pode surgir mascarado com o da vítima conduzindo a uma “sobrerepresentação”do perfil genético da mesma Q uando os vestígios biológicos do agressor estão presentes em muito pequena quantidade e os resultados da fosfatase ácida para pesquisa de esperma são negativos, a pesquisa de Y STRs pode ser um complemento fundamental para a prova de que existe nas amostras estudadas material genético de origem masculina . A pesquisa de Amelogenina pode não ser a forma mais eficiente de comprovar a presença de material biológico masculino Nos casos em que a presença de material biológico masculino é escasso comparativamente ao da vítima (figura 2 ou quando ocorre delecção no gene da Amelogenina do cromossoma Y do agressor, este pode não ser detectado na análise de fragmentos, Nos casos em que se pode comparar o perfil genético das amostras com o perfil do suspeito, o estudo dos STRs autossómicos pode ser difícil de interpretar numa mistura de material biológico, sobretudo se estiver envolvido mais do que um suspeito O estudo dos Y STRs nestas amostras permite excluir imediatamente o(s) suspeito(s) se o perfil genético ou haplótipo não for coincidente. Se ocorrer coincidência dos resultados os restantes membros da mesma linha paterna não podem ser excluídos .Quando a vítima é um indivíduo do sexo masculino os resultados obtidos também são válidos, sendo possível identificar o perfil genético do agressor conhecendo o perfil genético da vítima, desde que não pertençam à mesma linha paterna.O Kit Powerplex®Y system poderá ser uma ferramenta muito útil para detectar quantidades mínimas de ADN masculino nas amostras recomendando se a sua utilização nos casos de agressão.

A individualidade humana concede a cada individuo uma personalidade jurídica e uma identidade pessoal. Esta unicidade possibilita a identificação humana que constitui-se como o alicerce da Genética e Biologia Forenses, que compreende o estudo e caracterização de marcadores polimórficos de ADN (Ácido Desoxirribonucleico), designados Short Tandem Repeats (STRs). Dado que a perícia produzida por esta área científica apresenta um elevado poder probatório, impõem-se uma atualização dos procedimentos implementados, visando incrementar a confiabilidade dos resultados obtidos. O presente projeto teve como propósito avaliar a adequabilidade do kit Investigator® 26Plex QS, Qiagen, à casuística do laboratório Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Centro do INMLCF, I.P., por meio de uma validação interna extensiva que visou a sua posterior implementação. Com este trabalho pretendeu-se relatar os procedimentos e parâmetros utilizados no decurso da validação interna deste ensaio, que encalçaram diretrizes internacionais da SWGDAM, assim como expender os resultados obtidos. Primeiramente, houve a necessidade de fixar critérios únicos de análise que permitissem validar e interpretar os perfis genéticos obtidos nos ensaios subsequentes. De seguida, pretendeu-se aferir o desempenho do kit, verificando a sua concordância com metodologias normalizadas no SGBF-C e avaliando a sua sensibilidade, especificidade, robustez e precisão. Complementarmente, foram efetuadas alterações ao protocolo original, nomeadamente redução de volume e amplificação direta, com vista a obter uma metodologia protocolar otimizada à rotina laboratorial. Este estudo compreendeu a análise de amostras biológicas provenientes de variados substratos, incidindo-se o estudo sobre amostras problema, de referência e amostras simuladas. O procedimento geral incluiu a extração de ADN, seguindose a sua quantificação, quando necessária, e, posterior amplificação pelo kit Investigator® 26plex QS. A eletroforese capilar realizou-se no sequenciador automático Applied Biosystems™ 3500 Genetic Analyzer, sendo a análise dos eletroferogramas efetuada no software GeneMapper™ ID-X 1.6.. Com este trabalho foi possível caracterizar as principais vantagens do kit Investigator® 26plex QS, assim como as suas limitações. Demonstrando-se que este kit de amplificação de ADN humano evidencia elevada robustez, confiabilidade, especificidade e sensibilidade, que permite a obtenção de um perfil genético completo com apenas 15 células humanas (1 ng de ADN).

Allele frequencies and other relevant forensic parameters of 15 loci studied with Applied Biosystems AmpFlSTRs NGM Kit were calculated in a population of individuals residing in the South of Portugal. Blood stain samples were obtained from a total of 350 unrelated individuals involved in paternity testing casework. This new kit has five loci not present in any other kit used in our laboratory (Promega Powerplex 16 System and Applied Biosystems Identifiler Plus): D10S1248, D22S1045, D2S441, D1S1656 and D12S391. The NGM multiplex kit is used in our forensic casework as an auxiliary screening tool to solve deficient casework such as fatherless paternity testing, and to help in paternity investigations with one genetic incompatibility after the routine seventeen loci typing. Furthermore, this five loci included in the European Standard Set are also recommended by the European Network of Forensic Science Institutes (ENFSI) and the European DNA Profiling group (EDNAP). These studies are necessary to calculate statistical forensic parameters such as power of discrimination, power of exclusion or minimum allele frequencies. Statistical parameters such as heterozigoty, homozigoty or allele frequencies were determined with Arlequim V3.5 and results compared with the ones reported in previous similar studies. As final remark, is important to remember that this kind of study is highly important for the Forensic Laboratories accreditation achievement

The biological individualization of samples is studied through DNA STR loci analysis and is the principal goal of Forensic Genetics. STR loci study was initiated in the 90s on the majority of Forensic Laboratories. vWA is one of the most studied STR loci all over the world. It is included in any STR set proposed by Forensic Groups as the 13 core loci of the CODIS System used in routine cases by most Forensic Genetic Laboratories. When performing paternity investigation and identification cases with STR loci, once in a while we came through rare or new alleles. Sequencing is essential to confirm the structure of these alleles. Also in mutation cases, especially in primer binding mutation cases, allele sequence should be performed. The high primer binding mutation observed in this locus and the interest in structure analysis of rare alleles observed in certain population groups were the main reasons for performing vWA sequence. More than one hundred vWA samples have been sequenced with DNA Sequencing Kit Big Dye Terminator Cycle Sequencing with forward and reverse primers (Kimpton et al, 1992 GenBank M25858). Sequencing was performed in an ABIPRISM 377 DNA Sequencer and analyzed by Sequencing Analysis. In this study we will present the structural analysis of vWA alleles from allele 11 to allele 22 studied in two main populations – a Portuguese population and an African population mainly from Cabo Verde Islands and Angola

Amphetamines consumption is still an important public health issue, namely in terms of compounds variability and disposition to consumers. However, some of them, still classic substances, keep standing in the illicit market, with remarkable and continuous success. That is the case of MDMA. Nevertheless, there is always new information and data on MDMA intoxication, both in vivo as in post-mortem context. The authors report an intoxication case with MDMA in an 18 years old male, who was considered a potential organ donor, after a cardiac arrest. Whole blood samples were collected in vivo, at the Emergency Room (ER), in different moments, and post-mortem, at the Forensic Pathology Service of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Science. After a general screening procedure, samples were extracted by an SPE procedure (OASIS® MCX) followed by a GC-MS single quad analysis. The post-mortem whole blood sample was positive for Lidocaine (< 500 ng/mL), compatible with ER intervention, and positive for MDMA (2278 ng/mL) and MDA (49 ng/mL), while the whole blood samples collected in vivo (during the maintenance of the individual under advanced life support), were positive for MDMA (between 504 ng/mL and 1918 ng/mL) and MDA (between 20 ng/mL and 89 ng/mL). The samples were negative for other substances, namely ethanol, other drugs of abuse and medicines. Interpretation of these results is pivotal to understand the behaviour of the substance. So, in this case, MDMA post-mortem behaviour should be carefully evaluated, considering as possible influencers, in the specific context of the case, the time lapse between the death verification, the maintenance of the advanced life support and the body manipulation for organ collection purposes. Also referred and discussed is the ante-mortem/post-mortem ratio of MDMA obtained values, compared with literature references. No doubt that death was due to MDMA intoxication, but information from the in vivo samples analysis suggests that this type of sample should also be considered, in a complementary role, whenever possible.

Introdução: O crime de violação encontra-se tipificado no artigo 164.º do Código Penal Português, na secção dos crimes contra a liberdade sexual e subentende o não consentimento por parte da vítima e é definido pelo constrangimento, isto é, qualquer meio empregue para a prática de atos de cópula, coito anal, coito oral ou introdução vaginal, anal ou oral de partes do corpo ou objetos contra a vontade cognoscível da vítima. Em situações de alegada agressão sexual recente, é necessária a intervenção dos peritos do INMLCF, IP na realização de perícias médico-legais urgentes, de modo a assegurar com brevidade a observação de vítimas de violência, com o intuito de colher vestígios ou amostras suscetíveis de se perderem ou degradarem rapidamente, que, posteriormente, são enviadas ao Serviço de Genética e Biologia Forenses do INMLCF, IP, para eventual identificação de perfis genéticos distintos do da vítima e que possam vir a ser comparados com os dos arguidos. Em determinadas circunstâncias, é relevante a realização de perícias complementares de Psiquiatria Forense, para aferição dos pressupostos médico-legais para inimputabilidade, avaliação da perigosidade e identificação das caraterísticas psíquicas dos agressores. O objetivo deste trabalho é aferir a importância da atividade pericial forense na decisão judicial de um caso de alegada violação e evidenciar o contributo da sua multidisciplinaridade. Material e Métodos: Consulta da plataforma informática MedLeg para identificação e seleção dos relatórios periciais relacionados com o processo em apreço; Consulta dos relatórios de Genética Forense e dos Autos do processo judicial relacionados com o processo em apreço. Resultados e Discussão: O exame pericial urgente, efetuado no dia da alegada agressão sexual, identificou lesões traumáticas recentes na região genital, tendo sido colhidas amostras biológicas, as quais, mantendo a cadeia de custódia, foram enviadas para o Serviço de Genética e Biologia Forenses do INMLCF, IP. Nessas amostras foram identificados perfis genéticos: um feminino, coincidente com a amostra de referência da vítima e um haplótipo do cromossoma Y, que posteriormente foi coincidente com o do arguido. O arguido, com antecedentes criminais (incluindo violação), foi detido preventivamente, tendo sido efetuada perícia complementar de Psiquiatria Forense que concluiu pela existência de pressupostos médico-legais de imputabilidade e por apresentar um risco de violência moderado a alto. Por fim, o arguido foi acusado e condenado por vários crimes, incluindo violação, na forma consumada e reincidente. Conclusões: No caso em apreço, tornou-se evidente que a execução da perícia médico-legal urgente, o adequado acondicionamento das amostras, o seu processamento pela Genética e Biologia Forenses e a perícia de Psiquiatra Forense, constituíram meios de prova essenciais que fundamentaram a decisão de acusação do arguido e respetiva condenação por crime de violação.

Os Kits comerciais de amplificação de STRs autossómicos para aplicação forense permitem obter informação genética com grandepoder de discriminação. Atualmente os kits mais recentes permitem obter poderes de discriminação que variam entre 1 x 10E18 (para 15 STRs autossómicos) e 1 x 10E26 (para 21 STRs autossómicos). Um número crescente de loci, contribui para que esse poder de discriminação aumente infinitamente. Por outro lado, os desenvolvimentos ao nível da bioquímica têm resultado na deteção de concentrações muito baixas de ADN, tipicamente descritas como amostras com baixa concentração, e posterior obtenção de perfis genéticos em vestígios biológicos, onde há pouco tempo atrás era quase impossível obter esses resultados. A obtenção de perfis genéticos, não pode ser dissociada da valorização estatística da respetiva prova pericial. Existem alguns softwares estatísticos disponíveis, entre os quais o “Euroformix-casesolver” e o LRMix, com modelos de cálculo distintos com aplicação na avaliação estatística dos casos criminais. A principal vantagem do “Euroformix-casesolver”, comparativamente aos softwares disponíveis, consiste na utilização da informação relativamente à intensidade de sinal do produto amplificado (altura em RFUs) e deste modo permite introduzir no cálculo a informação desta variável, avaliada até à presente data, de forma qualitativa. Este trabalho tem como objetivo a comparação de resultados de valorização da prova em casos forenses complexos com o Euroformix – Casesolver e LRMIX Studio. Foram selecionados três perfis genéticos de mistura, provenientes de casos complexos de investigação criminal com perfis genéticos de vítima e suspeito. Pretende-se efetivamente demonstrar que o “Euroformix-Casesolver” é uma ferramenta de cálculo muito eficaz e adequada para aplicação nos casos criminais forenses, sobretudo nos casos de misturas complexas em particular os que envolvem familiares.

In forensic DNA typing, short tandem repeats (STRs) are the most frequently genotyped markers in order to distinguish between individuals and to relate them to a crime or to exonerate the innocent. In recent years, new controversies have arisen with the advent of more sensitive techniques, allowing profiles to be recovered from minimum amounts of DNA, hence, bringing challenges to weight of evidence evaluation for forensic DNA profiles obtained from low template DNA samples. Introduction of interpretation models, or even new weight of evidence software should be accompanied by a measure of uncertainty that is part of any biological analysis. Specially, due to stochastic effects, the reliability of the obtained profiles might differ between machinery, workflow and also PCR settings in use in different laboratories. In this work we try to understand the relation between Peak Area, DNA concentration and also size marker, using adequate regression models. Buccal swabs from 180 individuals, with unknown identity, were selected for this study. DNA was extracted with prep-n-go™ buffer and quantified using Quantifiler® Trio DNA Quantification kit in a 7500 Real-Time PCR System (Applied Biosystems). STR amplification was performed with Powerplex Fusion 6C amplification kit (Promega). Amplified PCR products were separated and detected in an Applied Biosystems® 3500 Genetic Analyzer using manufacturer’s conditions. Electrophoresis results were analysed with GeneMapper® ID-X v1.4. Statistical analysis was performed with R Studio. Our results allow having an important overview about the relation between DNA concentrations, peak area, and size of the studied genetic markers.

O consumo de antidepressivos representa uma problemática mundial, apresentando Portugal uma das taxas de prevalência de doenças mentais mais elevadas da Europa1. A monitorização terapêutica é instituída para um pequeno número de fármacos para os quais existe uma relação direta entre a concentração e o efeito farmacológico. Este trabalho compara duas metodologias desenvolvidas para a determinação de antidepressivos (fluoxetina, venlafaxina, sertralina, citalopram, paroxetina e metabolitos) em amostras de fluido oral com recurso à cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa em tandem. O primeiro método utiliza amostragem por dried saliva spots (DSS) como técnica de extração. O volume de amostra foi de 100 μL e o procedimento foi otimizado utilizando a ferramenta estatística Design of Experiments (DoE) para avaliação dos tempos de secagem e extração e do solvente e volume do solvente de extração. As recuperações variaram entre 13 e 46%2. A segunda metodologia implementa a microextração em seringa empacotada (MEPS), utilizando 250 μL de amostra. Esta técnica foi otimizada utilizando a ferramenta de DoE para avaliação do número de strokes no load da amostra, número de lavagens e número de eluições. As recuperações variaram entre 12 e 93%. Ambos os métodos foram validados seguindo diretrizes internacionais. Os limites de quantificação foram estabelecidos entre 10-100 ng/mL e o intervalo de linearidade variou entre 10-500 ng/mL para ambas as metodologias (dentro do intervalo terapêutico). Este trabalho é o primeiro a utilizar DSS e MEPS para determinação destes antidepressivos em fluido oral.