A individualidade humana concede a cada individuo uma personalidade jurídica e uma identidade pessoal. Esta unicidade possibilita a identificação humana que constitui-se como o alicerce da Genética e Biologia Forenses, que compreende o estudo e caracterização de marcadores polimórficos de ADN (Ácido Desoxirribonucleico), designados Short Tandem Repeats (STRs). Dado que a perícia produzida por esta área científica apresenta um elevado poder probatório, impõem-se uma atualização dos procedimentos implementados, visando incrementar a confiabilidade dos resultados obtidos. O presente projeto teve como propósito avaliar a adequabilidade do kit Investigator® 26Plex QS, Qiagen, à casuística do laboratório Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Centro do INMLCF, I.P., por meio de uma validação interna extensiva que visou a sua posterior implementação. Com este trabalho pretendeu-se relatar os procedimentos e parâmetros utilizados no decurso da validação interna deste ensaio, que encalçaram diretrizes internacionais da SWGDAM, assim como expender os resultados obtidos. Primeiramente, houve a necessidade de fixar critérios únicos de análise que permitissem validar e interpretar os perfis genéticos obtidos nos ensaios subsequentes. De seguida, pretendeu-se aferir o desempenho do kit, verificando a sua concordância com metodologias normalizadas no SGBF-C e avaliando a sua sensibilidade, especificidade, robustez e precisão. Complementarmente, foram efetuadas alterações ao protocolo original, nomeadamente redução de volume e amplificação direta, com vista a obter uma metodologia protocolar otimizada à rotina laboratorial. Este estudo compreendeu a análise de amostras biológicas provenientes de variados substratos, incidindo-se o estudo sobre amostras problema, de referência e amostras simuladas. O procedimento geral incluiu a extração de ADN, seguindose a sua quantificação, quando necessária, e, posterior amplificação pelo kit Investigator® 26plex QS. A eletroforese capilar realizou-se no sequenciador automático Applied Biosystems™ 3500 Genetic Analyzer, sendo a análise dos eletroferogramas efetuada no software GeneMapper™ ID-X 1.6.. Com este trabalho foi possível caracterizar as principais vantagens do kit Investigator® 26plex QS, assim como as suas limitações. Demonstrando-se que este kit de amplificação de ADN humano evidencia elevada robustez, confiabilidade, especificidade e sensibilidade, que permite a obtenção de um perfil genético completo com apenas 15 células humanas (1 ng de ADN).

Medico-legal entomology, one area in the broad field of entomology, is routinely used in forensic applications. Insects are often collected from a corpse during criminal information related to the body, but requires the fast and accurate identification of the species attracted to the remains. The local entomofauna in most cases is important for explaining entomological evidence. The survey of the local entomofauna has become a fundamental first step in forensic entomological studies, because different geographical distributions, seasonal and environmental factors may influence the decomposition process and the occurrence of different species on corpses. A morphological and DNA-based methods for species identification were used in this study. Thirty-two cases are reported from indoors and outdoors conditions. Specimens were collected from corpses during autopsy procedures in the National Institute of Legal Medicine, Portugal, and cases were summarized by sex, death local, month of discovery, probable cause of death, species found and number of analyzed specimens. Just eight species, mainly Calliphoridae together with one Sarcophagidae were reported from corpses. The DNA sequencing was performed to study the mitochondrial encoded subunit I of the cytochrome oxidase gene. The aim of this work was the beginning of a database of the cadaveric entomofauna in Portugal.

New psychoactive substances (NPSs) still represent an issue of great concern worldwide despite efforts made by national and international control systems to limit the spread of these substances. Alpha-pyrrolidinohexanophenone (α-PHP) is a fairly recent synthetic cathinone (the second largest group of monitored substances in Europe) with only a few published studies on the substance. Though there is a low incidence of NPS consumption in Portugal, a recent increase in apprehensions and detections in biological matrices of the substance was verified. An analytical methodology was developed and validated for determining and quantitating α-PHP in blood. Solid-phase extraction was employed for sample preparation (500 μL), which was further analyzed by gas chromatography-mass spectrometry-electron ionization in single-ion monitoring mode with cocaine-d3 as the internal standard. Method validation followed the guidelines of the American National Standards Institute/AAFS Standards Board (ANSI/ASB Standard 036). The procedure was linear between 10 and 1,000 ng/mL, with determination coefficients (r2) higher than 0.999. Carryover was not observed. A limit of detection of 5 ng/mL and a limit of quantitation of 10 ng/mL were achieved. Intraday and intermediate precision and bias assessment showed satisfactory results (coefficient of variation <17.7%; bias <11.6%), and extraction efficiency ranged from 98.5% to 103.3%. The stability of the substance was considered acceptable for at least 6 h at room temperature, 48 h in the autosampler and 21 days after five freeze/thaw cycles. The developed methodology was applied to 15 real samples from the Laboratory of Chemistry and Forensic Toxicology, Centre Branch of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences, Portugal, with drug concentrations ranging from 15 to 227 ng/mL. Available information for each case is also detailed in the present article.

Due to the high prevalence of cannabinoids in forensic toxicology analysis, it is crucial to have an efficient method that allows the use of a small sample amount and that requires a minimal sample preparation for the determination and quantification of low concentrations. A simple, highly selective and high throughput liquid chromatography–tandem mass spectrometry methodology (LC–MS-MS-MS3) was developed for the determination and quantification of Δ9-tetrahydrocannabinol (THC), 11-hydroxy-Δ9- tetrahydrocannabinol (THCOH) and 11-nor-9-carboxy-Δ9-tetrahydrocannabinol (THC-COOH) in blood samples. Chromatographic analysis of THC, THC-OH and THC-COOH and their deuterated internal standards was preceded by protein precipitation (PPT) of 0.1 mL of blood samples with acetonitrile. Chromatographic separation was achieved by use of an Acquity UPLC® HHS T3 (100 mm × 2.1 mm i.d., 1.8 μm) reversed-phase column, using a gradient elution of 2 mM aqueous ammonium formate, 0.1% formic acid and methanol at a flow rate of 0.4 mL/min, with a run time of 10 min. For the MS-MS-MS3 analysis, a SCIEX QTRAP® 6500+ triple quadrupole linear ion trap mass spectrometer was used via electrospray ionization (ESI), operated in multiple reaction monitoring (MRM) and linear ion trap mode (MS3). The method was validated in accordance with internationally accepted criteria and guidelines, and proved to be selective and linear between 0.5 and 100 ng/mL (r2 > 0.995). The lower limits of quantification (LLOQ) corresponded to the lowest concentrations used for the calibration curves. The coefficients of variation obtained for accuracy and precision were <15%. The mean recoveries were between 88.0% and 117.2% for the studied concentration levels (1 ng/mL, 5 ng/mL and 50 ng/mL). No significant interfering compounds, matrix effects or carryover were observed. The validated method provides a sensitive, efficient and robust procedure for the quantification of cannabinoids in blood, using LC–MS-MS-MS3 and a sample volume of 0.1 mL. This work is also a proof of concept for using LC–MS3 technique to determine drugs in biological samples.

A Base de Dados de Perfis de ADN, criada com a publicação da Lei n.º 5/2008, de 12 de fevereiro, veio permitir a inserção de perfis de ADN de “arguido condenado por crime doloso com pena concreta de prisão igual ou superior a 3 anos” (art. 8º, nº 2), bem como de “arguido declarado inimputável a quem seja aplicada a medida de segurança de internamento” (art. 8º, nº 3). Desde a sua criação em 2010 e até dezembro de 2022, foram já inseridos um total de 14657 registos de arguidos condenados, a pedido das 22 Comarcas que constituem a Organização Judiciária Portuguesa. Ao longo dos anos, e até 2019, diversos trabalhos foram apresentados, no quais foram espelhados diversos dados que refletiam a caracterização da Base de Dados de Perfis de ADN portuguesa. Importa, por isso, dar continuidade ao trabalho que tem sido desenvolvido, fazendo uma análise retrospetiva dos três últimos anos (janeiro de 2020 a dezembro de 2022). Ao longo deste período foram inseridos 4244 registos de arguidos condenados, cujas condenações totalizam 7375 crimes. Tendo por base estes dados, considera-se relevante analisar a representatividade de cada Comarca no total das inserções realizadas no intervalo de tempo suprarreferido. Importa também fazer uma caracterização geral dos crimes associados aos arguidos condenados, que levaram à sua inclusão na Base de Dados de perfis de ADN, de forma a perceber quais os que têm uma maior expressão a nível nacional. Por último, e com o intuito de fazer um estudo conjunto destas variáveis, é feita uma análise dos crimes prevalecentes, em função das Comarcas avaliadas.