Caracterização bioquimica e farmacologica da secreção da glandula de Duvernoy da colubridea aglifa Dryadophis bifossatus (Jararacussu-do-bejo)

• Author(s): Heleno, Mauricio Aurelio Gomes, 1962-
• Date: 1997
• Persistent ID: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1585604
• Origin: Oasisbr
• Subject(s): Venenos de serpentes; Toxicologia; Venenos
• Document Type: Master thesis
• Language: Portuguese

Description

Orientadores: Marcos Dias Fontana, Stephen Hyslo

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas

Resumo: Esta tese descreve as atividades bioquímicas, biológicas e farmacológicas do extrato aquoso da glândula de Duvernoy ( GD.) da colubrídea áglifa Dryadophis bifossatus bifossatus (Jararacussú- do-brejo). As glândulas foram obtidas de espécimes adultos de ambos os sexos (sacrificados com pentobarbital sódico, Nembutal®, > 30 mg/kg) e homogenizadas em solução tampão de carbonato de amónio (0,1 M; pH 8,0) mantidas em gelo até a centrifugação (4.000 rpm, 30 min, 4°C) e liofilização do sobrenadante. O extrato da G.D. preparado como descrito acima contém cerca de 82% de proteínas e não possui atividade hialuronidásica, fosfolipásica A2 ou pró- coagulante, mas potencializou o tempo de recalcificação do plasma e demonstrou níveis moderados de atividade fosfodiesterásica (2,12 ± 0,09 u/mg) e proteásíca (4,45 ± 0,1 u/mg) (n=3 para cada ensaio). O extrato (200jig/poço) não aglutinou os eritrócitos humanos tripsinizados e fixados em formaldeído nem causou hemorragia intradérmica em ratos (500|ig/sítio, n=3). Fracionamento do extrato da G.D.(20mg) por gel filtração em Sephacryl S-200 HR (coluna de 1,1 cm x 50 cm) em carbonato de amónio (0,1 M; pH 8,0) e eletroforese em SDS-PAGE revelou a presença de proteínas na faixa de massa molecular de 14 - 60 KDa. O extrato da G.D. inibiu fortemente a transmissão neuromuscular em preparações de aves , mas não de mamíferos. Este bloqueio dose-dependente e irreversível envolveu os receptores pós-sinápticos nicotínicos. Gel filtração em Sephacryl S-200 HR seguida por troca iônica em coluna Resource S (Pharmacia), revelou uma proteína com massa molecular de 14-18 KDa responsável pela atividade neurotóxica do extrato da G.D. sem, contudo, apresentar efeito direto sobre a fibra muscular na preparação biventer cervicis

Abstract: This thesis describes the biochemical, biological and pharmacological activities of an aqueous extract of the Duvernoy's gland (DG) of the aglyphous colubrid Dryadophis bifossatus bifossatus (jararacussu-do-brejo). The glands were removed from adult specimens of both sexes (sacrificed with sodium pentobarbital, Nembutal®, >30 mg/kg) and then homogenized in ammonium carbonate buffer (0.1 M, pH 8.0) on ice prior to centrifugation (4000 rpm, 30 min, 4°C) and lyophilization of the resulting supernatant. DG extract prepared as above contained 82% protein and possessed no hyaluronidase, phospholipase A or pro-coagulant activities but potentiated the plasma recalcifi cation time and showed moderate levels of phosphodiesterase (2.12 ± 0,09 u/mg) and protease (4.45 ± 0.1 u/mg) (n=3 for each assay). The extract (200 mg/well) did not agglutinate human trypsinized, formaldehyde-fixed erythrocytes nor did it cause intradermal hemorrhage in rats (500 mg/site, n=3). Fractionation of the DG extract (20 mg) by gel filtration on Sephacryl S-200 HR (1.1 cm x 50 cm column) in 0.1 M ammonium carbonate buffer (pH 8.0) and electrophoresis in SDS-containing polyacrylamide gels revealed the presence of proteins ranging in molecular mass from 14 kDa-60 kDa. The DG extract potently inhibited neuromuscular transmission in avian, but not mammalian, nerve muscle preparations. This blockade, which was dose- and time-dependent as well as irreversible, involved post-synaptic nicotinic receptors. Sequential gel filtration on Sephacryl S-200 HR followed by ion exchange on a Resource S column (Pharmacia), yielded a protein with a molecular mass of 14-18 kDa that accounted for nearly all of the neurotoxic activity of the DG extract. The extract had no direct effect on biventer cervicis muscle

Mestrado

Farmacologia

Mestre em Ciências Médicas