Padronização de ensaio imunoenzimatico para detecção de enterotoxina estafilococica do tipo B

• Autor(es): Mollo, Vera Maria de Hollanda
• Data: 1999
• Identificador Persistente: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1587438
• Origem: Oasisbr
• Assunto(s): Estafilococos aureos; Enterotoxinas; Intoxicação alimentar
• Tipo de Documento: Dissertação de mestrado
• Idioma: Português

Descrição

Orientador: Jose Luiz Pereira

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Resumo: Métodos de detecção de enterotoxinas estafilocócicas, sensíveis, rápidos e específicos obtidos diretamente de extrato de alimentos são importantes para a diminuição no tempo de diagnostico de intoxicações alimentares e no controle sanitário de alimentos. O trabalho visou 'a produção, purificação de enterotoxina estafilocócica do tipo B (EEB) para obtenção de respectiva anti imunoglobulina (lgG anti-EEB) e padronização da metodologia ELlSA "Duplo Sanduíche" para detecção de enterotoxina B em alimentos.A enterotoxina B foi purificada através de três etapas utilizando-se resina de troca iônica AMBERLlTE CG-50 e CM-Sepharose e coluna de exclusão molecular Sephadex G-75. A purificação de enterotoxina foi determinada através de eletroforese SDS - PAGE. A enterotoxina estafilocócica do tipo B purificada foi utiliza~a para imunização de coelhos e cobaias. Os anti-soros policlonais antitoxina B foram utilizados para padronização de método imunoenzimático (EIE) duplo sanduíche visando a detecção de enterotoxina estafilocócica do tipo B em alimentos. A fração IgG foi purificada por fraCionamento com sulfato de amônia e posteriormente foi feita a cromatografia em coluna de exclusão molecular Sephacryl S-200. No método imunoenzimático duplo sanduíche utilizou-se como anticorpo de captura a imunoglobulina de coelho imunizado anti-enterotoxina 8 e como anticorpo detetor o anti-soro obtido de cobaia imunizada. o ensaio imunoenzimático foi padronizado utilizando-se como antígeno a enterotoxina 8 purificada. A técnica do ELlSA mostrou-se bastante sensível sendo detectado 1 ng/ml de enterotoxina estafilocócica B.

Abstract: Methods of detection of staphylococci enterotoxin, which are sensitive, fast and specifc when obtained directly from the extract of food are important for the decrease in time of diagnose of foodborne intoxications and in the sanitary control of foods. This work intended to produce and purificate staphylococci type B (EEB) for obtaining the respective anti imunoglobulina (lgG anti-EEB) and standardization of the ELlSA "Double Sandwich" methodology for detection of enterotoxin B from food. The enterotoxin-B was purified through three stages. For this purpose, ionic change AMBERLlTE CG - 50 resin, CM-Sepharose and molecular exclusion Sephadex G -75 column more used. The enterotoxin purification was determined through eletroforese SDS - PAGE. The stafilococci purified enterotoxin type B was used for immuniz~tion of rabbits and guinea-pig. The policlonals antiserums antitoxin B was used for standarlization of double sandwich imunoenzimatic (EIE) seeking the detection of stafilococci enterotoxin type B in food. The fraction IgG was purified by precipitation with ammonia sulfate followed by molecularexclusion Sephacryl S-200 collumn chromatography. The imunoglobulin antienterotoxin B of immunized rabbit was used as capture antibody and the antiserums of immunized guinea-pig was used as detector antibody in the double sandwich ELlSA. The ELlSA standardized by using the purified enterotoxin B as antigen ELlSA technique, revealed to be sensitive, being able to detect 1 ng/ml of staphylococci B enterotoxin.

Mestrado

Mestre em Ciência de Alimentos