Author(s): Viana, Giselle Maria Rachid ; Barbosa, Danielle Regina Lima ; Carmo, Ediclei Lima do ; Peres, Jos? M?rio Veloso ; Nascimento, Jos? Maria Souza ; P?voa, Marinete Marins
Date: 2018
Origin: Oasisbr
Subject(s): Mal?ria / epidemiologia; Mal?ria / preven??o & controle; Estudos de Avalia??o; Mal?ria / transmiss?o; Rea??o em Cadeia da Polimerase / normas
Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Laborat?rio de Pesquisas B?sicas em Mal?ria. Ananindeua, PA, Brasil.
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Um diagn?stico laboratorial correto e preciso de mal?ria humana ainda ? considerado um desafio, pois o m?todo de refer?ncia, o da gota espessa com coloca??o pelo Giemsa, apresenta limita??es que dificultam o controle da mal?ria. Devido a esses problemas, v?rias pesquisas t?m objetivado desenvolver m?todos alternativos para o diagn?stico da mal?ria. Grande parte desses estudos aborda m?todos de diagn?stico molecular, que t?m acarretado o desenvolvimento de algumas alternativas ao m?todo de colora??o pelo Giemsa. No entanto, esses m?todos, por sua vez, apresentam suas limita??es, que incluem seu alto custo, a complexidade do protocolo e a varia??o da qualidade das fontes de DNA e de reagentes. Neste aspecto, a t?cnica de nested PCR tem demonstrado ser um bom m?todo e pode ser melhorado usando uma fonte de DNA de alta qualidade. Neste estudo foram avaliados dois m?todos para a obten??o de DNA de amostras de sangue seco colhidas em papel de filtro: 1) lavagem e 2) saponina/Chelex-100. O segundo m?todo apresentou sensibilidade e especificidade mais altas em rela??o ao primeiro, pois detectou mais infec??es, tanto simples como mistas, bem como infec??es por Plasmodium malariae. Com base nesses resultados, apresentamos o segundo como o protocolo de escolha para a obten??o de DNA. A t?cnica de nested PCR usando saponina/Chelex-100 para extra??o de DNA pode ser um m?todo alternativo ou complementar de diagn?stico de parasitas da mal?ria humana, mas n?o ? considerado adequado para o uso de rotina.
The correct and precise laboratory diagnosis of human malaria is still a challenge because the reference method, the Giemsa-stained thick blood smear (TS), has limitations that present problems for malaria control. Because of these problems, several studies have attempted to develop alternative methods for malaria diagnosis. Many of these studies focus on molecular diagnosis methods and have led to the development of some alternatives to TS. However, their limitations include high cost, protocol complexity and variable quality of DNA sources and reagents. Nested PCR has been shown to be a good method in this respect and it can be improved by using a high-quality source of DNA. In this study we evaluated two methods for the obtainment of DNA from dried blood samples on filter paper: 1) washing and 2) saponin/chelex-100. The second method showed higher sensitivity and specificity compared to the first, as it detected more infections, whether single or mixed, as well as Plasmodium malariae infections. Based on these results, we present this method as the protocol of choice for DNA obtainment. Nested PCR using saponin/chelex-100 for DNA extraction could be an alternative or complementary diagnosis method for human malaria parasites, but it is not appropriate for routine use.
