Estudo comparativo e de validação de ensaios de quantificação de DNA, total e fração masculina, em amostras forenses, com diferentes metodologias e equipamentos

• Autor(es): Feiteiro, Mariana Cabaço Leça
• Data: 2025
• Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10400.5/101364
• Origem: Repositório da Universidade de Lisboa
• Assunto(s): Quantificação; Validação; DNA nuclear; qPCR; Teses de mestrado - 2025
• Tipo de Documento: Dissertação de mestrado
• Idioma: Português
• Contribuidor(es): Repositório Científico de Acesso Aberto da ULisboa; Amorim, António

Descrição

A Genética Forense utiliza o DNA como alvo de análise na resolução de casos forenses, contudo a quantidade presente nas amostras pode variar consideravelmente, o que poderá colocar em causa a obtenção de perfis genéticos. A quantificação de DNA permite a análise da quantidade e qualidade de DNA na amostra, de forma a adaptar o restante protocolo. A técnica de qPCR é considerada uma das mais precisas e sensíveis para quantificação, permitindo acompanhar, em tempo real, o produto amplificado. Para a implementação de um ensaio é necessária a sua prévia validação, de forma a testar as suas capacidades de execução. No Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P., procedeu-se à validação interna de ensaios de quantificação de DNA, aplicando os kits Quantifiler Trio e Investigator Quantiplex aos equipamentos QuantStudio5 e CFX Opus 96. A validação foi realizada de forma direta através da comparação de resultados de 24 amostras problema com o método previamente validado Quantifiler Trio aplicado ao 7500 Real-Time PCR System, e de forma indireta, através da análise da especificidade, sensibilidade, repetibilidade, reprodutibilidade e capacidade de distinção entre DNA feminino e masculino, através da análise de amostras controlo. No âmbito da Genética e Biologia Forenses, os resultados apresentados pelo ensaio Quantifiler Trio aplicado ao QuantStudio5 permitiram a sua validação interna, demonstrando este um melhor desempenho, comparativamente aos restantes ensaios estudados. Já os resultados apresentados pelo ensaio Investigator Quantiplex aplicado ao QuantStudio5 permitiram a sua validação para amostras com concentração dentro da reta de calibração, enquanto os resultados apresentados pelo ensaio Investigator Quantiplex aplicado ao CFX Opus 96, apenas permitiram a sua validação para a região-alvo autossómica. Relativamente ao ensaio Quantifiler Trio aplicado ao CFX Opus 96, será necessária a sua posterior validação indireta.