Author(s): Sousa, Diana Andrade
Date: 2022
Persistent ID: https://hdl.handle.net/1822/81310
Origin: RepositóriUM - Universidade do Minho
Subject(s): Aptâmeros; Cancro; Exossomas; Lipossomas; Terapia genética; Aptamers; Cancer; Exosomes; Liposomes; Gene therapy
O cancro é uma das principais causas de morbidade e mortalidade a nível mundial, e as suas metástases são responsáveis por cerca de 90% das mortes. As atuais abordagens terapêuticas têm baixas taxas de sucesso em casos de doença metastática e a maioria dos pacientes não pode ser curada. Portanto, é crucial encontrar novas estratégias para desenvolver terapias eficientes dirigidas ao alvo. As tecnologias baseadas na seleção de aptâmeros facilitaram a descoberta de novos biomarcadores, especialmente através da tecnologia cell-SELEX, que permite a identificação de ligandos para um tipo específico de células. Deste modo, essa tecnologia foi usada para identificar um aptâmero específico para a linha celular metastática de osteossarcoma MG-63. O aptâmero mais promissor (OS-7.9) foi selecionado através de análise bioinformática, e os ensaios in vitro demonstraram a sua alta afinidade para as células-alvo, bem como para células de órgãos para os quais o osteossarcoma tem tendência a metastizar. Além disso, a tecnologia cell-SELEX foi utilizada em combinação com a sequenciação de nova geração e análise bioinformática para identificar sequências de aptâmeros (Apt1 e Apt2) com alta afinidade e especificidade para a linha celular metastática de cancro de mama (CM) MDA-MB-231. A possível translação clínica também ficou demonstrada para o Apt2 através da utilização de secções de tecido de CM. No que diz respeito aos nanossistemas de entrega de agentes terapêuticos, os sistemas não virais foram os selecionados devido à sua segurança para aplicações biomédicas. Sistemas de lipossomas catiónicos foram avaliados para o transporte de plasmídeos CRISPR/Cas9 e consequente terapia genética na linha celular usada para validação, as HEK 293T. Ensaios in vitro demonstraram elevada eficiência de transfeção e capacidade de disrupção de genes por lipoplexos à base de lípido MVL5. Estudos sobre a disrupção do microRNA-155 na linha metastática de CM Hs 578T revelaram uma ativação dos marcadores apoptóticos, bem como um aumento da paragem do ciclo celular na fase G2/M e inibição da migração. Também foram usados exossomas para a entrega de plasmídeos CRISPR/Cas9, devido à capacidade natural destas vesículas de transportar material genético. Os exossomas foram modificados com um péptido que reconhece especificamente o recetor EGFR (péptido GE11) para melhorar a internalização celular em células de CM que expressam este recetor. No geral, os resultados obtidos nesta dissertação contribuíram para o objetivo de desenvolver novas abordagens terapêuticas para cancro metastático através da identificação de novos ligandos específicos para posterior incorporação em nanossistemas de entrega, tais como lipossomas e exossomas que têm capacidade de transportar plasmídeos CRISPR/Cas9 para a aplicações de terapia genética em cancro.
