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Estabilidade e estrutura das cadeias A e B da molécula de insulina

Author(s): Rêgo, Alexandre Mário Duarte do

Date: 2013

Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.26/14116

Origin: Egas Moniz - Cooperativa de Ensino Superior, CRL

Subject(s): Insulina; PDI; DLS; Estabilidade


Description

O presente trabalho de investigação baseia-se na hipótese das cadeias A e B de insulina apresentarem comportamentos e estabilidade diferentes quando expostas às mesmas condições como consequência das diferenças verificadas na sua sequência. Assim, os objetivos estabelecidos foram em primeiro lugar a obtenção das duas cadeias com recurso à enzima responsável pela sua obtenção a nível biológico, a proteína dissulfito isomerase (PDI), seguida da determinação de possíveis produtos de interesse. Por fim, o último objetivo traçado foi a mimetização da reação que ocorre fisiologicamente e por conseguinte a obtenção das cadeias purificadas para avaliação da sua estabilidade. A metodologia utilizada divide-se em três partes fundamentais. A primeira consiste na avaliação da atividade da PDI na presença de insulina, utilizando-se para o efeito o ensaio turbidimétrico e um ensaio enzimático. A segunda parte incide na análise dos produtos de degradação com recurso à técnica de cromatografia líquida de alta eficiência, de modo a identificar péptidos de interesse. Por fim, a última parte consiste na avaliação da estabilidade das cadeias A e B de insulina obtidas através de um método químico pela técnica de dispersão dinâmica da luz. Os resultados obtidos permitiram constatar a hipótese estabelecida inicialmente, dado que as cadeias A e B de insulina apresentam comportamentos e estabilidade diferentes quando expostas às mesmas condições. Foi igualmente verificado que a agregação é uma característica inata à insulina e suas cadeias, sendo contudo necessários mais estudos relativamente à cadeia B para a compreensão deste comportamento.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Document Type Master thesis
Language Portuguese
Advisor(s) Caldeira, Francisco Jorge
Contributor(s) Rêgo, Alexandre Mário Duarte do
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