Investigation of the genetic etiology of sensorineural hearing loss in portuguese patients

• Author(s): Gonçalves, Ana Cláudia Gasparinho, 1989-
• Date: 2012
• Persistent ID: http://hdl.handle.net/10451/8293
• Origin: Repositório da Universidade de Lisboa
• Subject(s): Biologia molecular; Surdez; Mutações; Teses de mestrado - 2012
• Document Type: Master thesis
• Language: English
• Advisor(s): Caria, Maria Helena; Silva, Pedro João Neves e, 1958-
• Contributor(s): Repositório da Universidade de Lisboa

Description

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012

About 2/1000 new born present hearing loss (HL) and of these, approximately 50% can be genetically explained. In this work, 70 Portuguese probands presenting nonsyndromic sensorineural HL were investigated for the presence of mutations in the DFNB1 locus. Mutation c.35delG, in the GJB2 gene, was first screened by restriction analysis. Two individuals were homozygous (2,9%) and five (7,1%) heterozygous for this mutation. The GJB2 coding exon was then analysed by sequencing in cases found to be negative or heterozygous for the c.35delG mutation. A novel mutation, p.Leu213X, was identified. This mutation wasn’t present in a random control sample of 480 individuals from the Portuguese population previously sequenced. Along with the two c.35delG homozygous, the genetic cause for HL due to GJB2 mutations could be determined for six more individuals, representing a total of 11,4% of the probands. The most frequent GJB6 deletions were further screened by multiplex PCR in individuals negative or monoallelic for GJB2 mutations. No mutation was found. Three common mitochondrial DNA mutations associated to HL were investigated by enzymatic restriction in 143 families, previously screened for DFNB1 and compatible with maternal inheritance. Only the m.1555A>G mutation was found, in one of the analysed families. Two cases of low-frequency sensorineural HL were investigated regarding the most relevant exons of WFS1 gene. A novel mutation, p.Asp171Asn, was found in exon 5 of WFS1 gene. This mutation wasn’t present in 100 Portuguese hearing controls later sequenced. Two cases of Pendred Syndrome were studied. No mutation was found in the relevant exons analysed. So, the genetic cause couldn´t yet be determined. This study represents a contribution for extending the knowledge on hereditary HL in the Portuguese population, either in the identification of the genetic etiology in affected families, or in the development of more accurate diagnostic protocols.

Cerca de 2/1000 recém-nascidos apresentam surdez e, nestes, aproximadamente 50% têm uma causa genética. No presente trabalho, foram estudados 70 probandos Portugueses com surdez não- sindrómica neurosensorial. A análise iniciou-se com o estudo da mutação c.35delG no gene GJB2 através de restrição enzimática. Dois indivíduos apresentaram esta mutação em homozigotia (2,9%) e cinco em heterozigotia (7,1%). O exão codificante de GJB2 foi analisado por sequenciação em todos os casos negativos ou heterozigóticos para c.35delG. Uma nova mutação, p.Leu213X, foi descoberta. Esta mutação não foi encontrada numa amostra aleatória de 480 indivíduos da população Portuguesa. Juntamente com os indivíduos homozigóticos para c.35delG, a causa genética da surdez devida a GJB2 foi determinada para mais seis indivíduos, representando no conjunto 11,4% dos probandos. As deleções mais frequentes no gene GJB6 foram investigadas por PCR multiplex em indivíduos monoalélicos ou negativos para GJB2. Nenhum dos indivíduos apresentou deleções em GJB6. As três mutações mais comuns associadas a surdez no DNA mitocondrial foram investigadas por restrição enzimática em 143 famílias previamente testadas para GJB2 e compatíveis com hereditariedade materna. Apenas numa família foi encontrada a mutação m.1555A>G. Dois casos de surdez neurosensorial com perdas nas baixas frequências foram estudados através da análise dos exões mais relevantes do gene WFS1. Uma nova mutação, p.Asp171Asn, foi encontrada no exão 5 deste gene. Esta mutação não foi encontrada em 100 controlos Portugueses ouvintes posteriormente sequenciados. Dois casos esporádicos de Síndrome de Pendred foram estudados mas nenhuma mutação foi encontrada nos exões analisados, pelo que a causa genética não pôde ser ainda determinada. Este estudo constituiu uma contribuição para aprofundar o conhecimento sobre a surdez hereditária na população Portuguesa. A importância do estudo genético fica aqui patente, quer na identificação da etiologia genética da surdez em famílias afectadas, quer no desenvolvimento de protocolos de diagnóstico mais eficazes.