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Análise de recetores de superfície em linfócitos de pacientes caninos com Linfoma B

Author(s): Freire, Miriam Monteiro

Date: 2018

Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.5/15006

Origin: Repositório da UTL

Subject(s): CD20; CD19; Linfoma B canino; Imunoterapia; Canine B lymphoma; Immunotherapy


Description

O linfoma canino constitui uma das neoplasias malignas mais frequentemente diagnosticada em cães, tendo normalmente origem em células B. Atualmente utiliza-se a quimioterapia como forma de tratamento desta patologia, mas a resistência aos fármacos anti-neoplásicos e a toxicidade destes, revela a necessidade de desenvolvimento de outras formas de tratamento, como a imunoterapia. Com o objetivo de validar alvos potenciais para imunoterapia do linfoma B canino, foi avaliada, através de Western Blot, a expressão proteica dos recetores CD20 e de CD19 de células primárias de linfoma canino. Para tal, foram utilizadas amostras de linfonodos de 20 animais com linfoma recolhidas no Hospital Escolar da FMV-ULisboa, e de 2 animais de controlo, sem linfoma. Durante a preparação das amostras, as células foram lisadas com o reagente RIPA para extração da proteína total, que foi posteriormente quantificada através do método de Bradford. Os resultados obtidos demostraram uma elevada expressão de CD20 em células primárias de linfoma B canino do biobanco e em CLBL-1 (linha estável de linfoma canino). Por outro lado, a avaliação da expressão do recetor CD19 não foi conclusiva. Foi também utilizada com sucesso a avaliação de potenciais alvos para imunoterapia através da técnica de Western Blot e deteção com um soro policlonal derivado de coelhos imunizados com células primárias de linfoma B canino. Estes resultados confirmam que tal como no Homem, no cão o CD20 é expresso particularmente em situações de linfoma B, validando este marcador como alvo potencial para imunoterapia. Ademais, foi igualmente possível demonstrar a identificação de outras proteínas no extrato proteico das células dos casos clínicos com o soro policlonal do coelho, podendo estas corresponder a recetores potenciais que poderiam ser usados como alvos terapêuticos ou como biomarcador / diagnóstico.

ABSTRACT - ANALYSIS OF SURFACE RECEPTORS IN LYMPHOCYTES OF CANINE PATIENTS WITH B CELL LYMPHOMA - Canine lymphoma is one of the most frequently diagnosed malignancies in dogs, usually originating from B cells. Chemotherapy is currently used as a treatment for this pathology, but the resistance to anti-neoplastic agents and the toxicity produced by these drugs, reveals the need to develop other forms of treatment, such as immunotherapy. In order to validate potential targets for canine B cell lymphoma immunotherapy, the proteic expression of CD20 and CD19 receptors of primary canine lymphoma cells was evaluated through Western Blot. For this purpose, lymph node samples from 20 animals with lymphoma collected at FMV-ULisboa School Hospital and 2 from control animals, without lymphoma, were used. During sample preparation, the cells were lysed with the RIPA reagent to extract the total protein, which was further quantified by the Bradford method. The results obtained demonstrated a high expression of CD20 in primary canine B-cell lymphoma cells from the biobank and in CLBL-1 (stable line of canine lymphoma). On the other hand, the evaluation of CD19 receptor expression was not conclusive. The evaluation of potential targets for immunotherapy using the Western blot technique and detection with a polyclonal serum derived from rabbits immunized with primary canine B lymphoma cells was also successfully used. These results confirm that as in humans, in the dog the CD20 is expressed particularly in situations of B cell lymphoma, validating this marker as a potential target for immunotherapy. In addition, it was also possible to demonstrate the identification of other proteins in the protein extract of the cells of the clinical cases with the rabbit polyclonal serum, which could correspond to potential receptors that could be used as therapeutic targets or as a biomarker / diagnosis.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

Document Type Master thesis
Language Portuguese
Advisor(s) Gil, Solange Judite Roque Coelho Alves; Silva, Frederico Aires da; Pinheiro, Silvia Pires
Contributor(s) Freire, Miriam Monteiro
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