Construção de um env quimérico HIV-1 / HIV-2

• Author(s): Figueiredo, Inês Brito
• Date: 2014
• Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.26/13046
• Origin: Egas Moniz - Cooperativa de Ensino Superior, CRL
• Subject(s): VIH-1; VIH-2; Anticorpos neutralizantes; Env quimérico
• Document Type: Master thesis
• Language: Portuguese
• Advisor(s): Barroso, Maria Helena
• Contributor(s): Repositório Comum

Description

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Introdução: O Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) representa, a nível mundial, um dos principais problemas de saúde pública. O agente etiológico responsável por esta pandemia é o Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH), que afeta 35 milhões de pessoas em todo o mundo. Objetivos: Construção dum env quimérico contendo a região C2, V3 e C3 do VIH-2 e as restantes do VIH-1 e reconstrução da sequência utilizada no ensaio clínico RV144 (gp120 da CRF_01_AE com uma porção da gp41 dum subtipo B (LAI)), onde a região C2, V3 e C3 do VIH-1 foi substituída pela homóloga do VIH-2. Os dois envs serão testados quando à sua capacidade de indução de anticorpos amplamente neutralizantes contra o VIH-1 e o VIH-2. Metodologia: Para a amplificação tanto da região C2V3C3 do VIH-2 como do env do VIH-1, procedeu-se à escolha de primers que reuniam as condições ideais para a correta concretização do processo. Recorreu-se à técnica de PCR (Reação de Polimerização em Cadeia) para a amplificação de cada região e à técnica de eletroforese para a confirmação de que os fragmentos correspondentes às regiões em estudo (593pb para a C2V3C3 e 1190pb para o megaprimer) foram efetivamente amplificados. Com recurso ao programa MEGA6, foi possível, não só a substituição da região C2V3C3 do VIH-1 pela mesma região do VIH-2, como a confirmação de que a proteína final seria funcional. Resultados: Foi possível a correta amplificação da região C2V3C3 do env do VIH-2, observando-se um fragmento de 593pb, confirmando o sucesso do processo de amplificação e da escolha apropriada dos primers utilizados. Todavia, tornou-se impossível a amplificação do megaprimer. Conclusão: Neste projeto, verificou-se a correta amplificação da região C2V3C3 do env do VIH-2. No entanto, tornou-se impossível amplificar o megaprimer. É, contudo, de considerar, a desafiante e inovadora estratégia introduzida, com o prepósito de analisar, em ratinhos, a resposta em anticorpos de ligação contra a gp120 do VIH-1 e VIH-2 e a resposta em anticorpos de neutralização para o VIH-1 e VIH-2.