Estabilidade e estrutura das cadeias A e B da molécula de insulina

• Author(s): Rêgo, Alexandre Mário Duarte do
• Date: 2013
• Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.26/14116
• Origin: Egas Moniz - Cooperativa de Ensino Superior, CRL
• Subject(s): Insulina; PDI; DLS; Estabilidade
• Document Type: Master thesis
• Language: Portuguese
• Advisor(s): Caldeira, Francisco Jorge
• Contributor(s): Repositório Comum

Description

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

O presente trabalho de investigação baseia-se na hipótese das cadeias A e B de insulina apresentarem comportamentos e estabilidade diferentes quando expostas às mesmas condições como consequência das diferenças verificadas na sua sequência. Assim, os objetivos estabelecidos foram em primeiro lugar a obtenção das duas cadeias com recurso à enzima responsável pela sua obtenção a nível biológico, a proteína dissulfito isomerase (PDI), seguida da determinação de possíveis produtos de interesse. Por fim, o último objetivo traçado foi a mimetização da reação que ocorre fisiologicamente e por conseguinte a obtenção das cadeias purificadas para avaliação da sua estabilidade. A metodologia utilizada divide-se em três partes fundamentais. A primeira consiste na avaliação da atividade da PDI na presença de insulina, utilizando-se para o efeito o ensaio turbidimétrico e um ensaio enzimático. A segunda parte incide na análise dos produtos de degradação com recurso à técnica de cromatografia líquida de alta eficiência, de modo a identificar péptidos de interesse. Por fim, a última parte consiste na avaliação da estabilidade das cadeias A e B de insulina obtidas através de um método químico pela técnica de dispersão dinâmica da luz. Os resultados obtidos permitiram constatar a hipótese estabelecida inicialmente, dado que as cadeias A e B de insulina apresentam comportamentos e estabilidade diferentes quando expostas às mesmas condições. Foi igualmente verificado que a agregação é uma característica inata à insulina e suas cadeias, sendo contudo necessários mais estudos relativamente à cadeia B para a compreensão deste comportamento.