Optimização da produção, extracção e quantificação de resveratrol e sua aplicação na inibição da urease de helicobacter pylori

• Author(s): Ferreira, Bruno Tiago Gonçalves
• Date: 2010
• Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.6/2855
• Origin: uBibliorum
• Subject(s): Resveratrol - Propriedades; Resveratrol - Aspectos anti-bacterianos
• Document Type: Master thesis
• Language: Portuguese
• Advisor(s): Domingues, Fernanda da Conceição; Sousa, Fani Pereira de
• Contributor(s): uBibliorum

Description

Desde há muitos séculos que se tem utilizado o resveratrol em formulações químicas e dietas botânicas com fins terapêuticos. Este composto é um estilbeno, pertencente à família dos polifenóis, sendo que a sua estrutura química alterna entre duas conformações cis- e trans-. A configuração mais estudada é a trans- por apresentar efeitos anti-oxidantes, anti-carcinogénicos, cardioprotectores e também propriedades anti-bacterianas sendo um dos alvos a Helicobacter pylori. Esta bactéria infecta cerca de 50 % da população mundial e é considerada um das principais causas de úlceras gástricas. O tratamento da infecção por Helicobacter pylori tem-se tornado menos eficiente nos últimos anos devido ao aumento da resistência a antibióticos. Torna-se assim necessário encontrar alternativas terapêuticas, podendo o resveratrol ser um auxiliar neste tratamento. O resveratrol já foi produzido com sucesso em plantas, células animais e microrganismos recombinantes, requerendo a produção nestes últimos ainda trabalho de optimização. Assim, neste trabalho, foi realizada a optimização da produção, extracção e quantificação de resveratrol a partir de diferentes meios de fermentação, e estudada a inibição de urease de Helicobacter pylori com resveratrol. Os meios 2xYT e 2xYT com 1% glicerol são os mais promissores para a produção de resveratrol. O melhor solvente orgânico numa estratégia de extracção liquído-liquído foi o acetato de etilo com uma percentagem de recuperação de cerca de 90%. A quantificação por HPLC e espectrofotométrica foi possível após um passo de clarificação das amostras com uma coluna superose 12 prep grade, obtendo-se valores similares para as duas técnicas. Foi possível efectuar o crescimento de Helicobacter pylori em meio líquido e proceder à extracção da urease. A urease extraída foi inibida com sucesso, com diferentes concentrações de resveratrol, a qual foi ainda avaliada com recurso à coloração de géis de electroforese de Fishbein.

For many centuries resveratrol has been used in chemical formulations and in botanical dietary for therapeutic purposes. Resveratrol is a stilbene that belongs to the family of polyphenols, and its chemical structure alternates between two conformations cis- and trans-. The most studied configuration of resveratrol it’s the trans- form because it has been demonstrated that has anti-oxidant, anti-carcinogenic, cardioprotective properties; it has also antibacterial properties, being one of the targets Helicobacter pylori. This bacterium infects about 50% of world population and is considered a major cause of stomach ulcers. In recent years the treatment of Helicobacter pylori infection has become less efficient due to increased antibiotic resistance. So, it becomes necessary to find alternative therapies, being resveratrol a valuable aid in this treatment. Resveratrol was successfully produced in plants, animal cells and recombinant microorganisms, and this last one requires optimization. Thus, this work was performed to optimize the production, extraction and quantification of resveratrol from different fermentation media, and to study the inhibition of urease of Helicobacter pylori by resveratrol. The most promising media for the production of resveratrol are 2xYT and 2xYT with 1% glycerol. The best solvent in liquid-liquid extraction was ethyl acetate with a recovery percentage of about 90%. The HPLC and spectrophotometric quantification was possible after clarifying the samples with a Superose 12 prep grade column, obtaining similar values for both techniques. The growth of Helicobacter pylori was possible in liquid media, and also urease extraction. Extracted urease was successfully inhibited with different concentrations of resveratrol, which was also assessed using the Fishbein staining for electrophoresis gel.