Autor(es): Toscano, Fernando Manuel Rodrigues
Data: 2013
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10451/10557
Origem: Repositório da Universidade de Lisboa
Assunto(s): Complexos 99mTc(I); Detecção tumoral; Captação celular; Mitocôndria; Sondas radioactivas; Teses de mestrado - 2013
Tese de mestrado em Química Inorgânica Biomédica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2013
Nesta tese estudaram-se os complexos catiónicos e lipofílicos 99mTc-TMEOP e 99mTc-DMEOP para avaliar o seu potencial como candidatos a sondas radioactivas para a detecção tumoral e detecção de resistência a múltiplos fármacos. A avaliação destes compostos foi realizada através de estudos de captação in vitro e in vivo. Numa primeira fase, utilizaram-se diferentes linhas tumorais para avaliar a captação dos organocomplexos referidos. Os complexos 99mTc-Sestamibi e 99mTc-Tetrofosmina actualmente utilizados em imagiologia clínica para estudos de perfusão do miocárdio e detecção tumoral foram utilizados em paralelo para efeitos comparativos. Os ensaios de captação celular permitiram observar que o 99mTc-DMEOP é, de entre os 4 complexos estudados, o que apresenta taxas mais elevadas de captação celular, seguido do 99mTc-TMEOP. Foi também observado que a linha celular que sobre-expressa a glicoproteína-P (MCF-7_Pgp) apresenta captações celulares mais baixas para todos os compostos utilizados. Estudou-se ainda os mecanismos pelos quais o complexo 99mTc-DMEOP entra nas células tumorais. Verificou-se que a captação celular é influenciada por alterações dos valores de Δψp e Δψm, com um forte contributo do Δψm na captação e retenção celulares. Na segunda fase foram realizados estudos in vivo. Nestes estudos utilizaram-se as linhas celulares tumorais MCF-7, MCF-Pgp e MDA-MB-231 para induzir tumores em ratinhos. Os resultados não mostraram níveis de fixação tumorais significativos mas, como esperado, observou-se uma elevada fixação ao nível do músculo cardíaco. Na terceira fase, a técnica de western blot mostrou a expressão da Pgp em todos os extractos tumorais, mas não nos extractos dos homogenatos das linhas celulares utilizadas para induzir tumores nos ratinhos.
In this thesis we studied the lipophilic and cationic complexes 99mTc-DMEOP and 99mTc-TMEOP to evaluate their potential as candidates for radioactive probes for tumour detection and detection of multidrug resistance. The evaluation of these compounds was performed by uptake studies in vitro and in vivo. In a first phase, individual tumour lines were used to assess uptake of the complexes above. The 99mTc-Sestamibi and 99mTc-Tetrofosmin complexes currently used in medical imaging to study myocardial perfusion and tumour detection were used in parallel for comparative purposes. Assays of cellular uptake allowed the observation that 99mTc-DMEOP is, among the four complexes studied, the one that presents higher rates of cellular uptake, followed by 99mTc-TMEOP. It was also observed that the cell lines overexpressing P-glycoprotein (MCF- 7 Pgp) have the lowest cell uptake of all the compounds used. The mechanisms by which the 99mTc-DMEOP complex enters the tumour cells were also studied. It was found that the cellular uptake is influenced by changes in the Δψp and Δψm values, with a strong contribution from Δψm in cellular uptake and retention. In the second phase studies were performed in vivo. In these studies we used tumour cell lines MCF-7, MCF-7 Pgp and MDA –MB 231 to induce tumours in mice. The results showed no significant levels of tumour fixation but, as expected, there was a high level attachment to the heart muscle. In the third phase, the western blot showed expression of Pgp in all tumour extracts but not in extracts from homogenates of cell lines used to induce tumours in mice.
