Estratégias para caracterização molecular das espécies aromáticas da flora portuguesa

• Autor(es): Lima, Ana Sofia Borges
• Data: 2009
• Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10451/1807
• Origem: Repositório da Universidade de Lisboa
• Assunto(s): Biotecnologia vegetal; Plantas aromáticas; Marcadores genéticos; Teses de mestrado
• Tipo de Documento: Dissertação de mestrado
• Idioma: Português
• Orientador(es): Trindade, Maria Helena Machado
• Contribuidor(es): Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição

Tese de mestrado, Biologia (Biologia Celular e Biotecnologia), 2009, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências

Este trabalho teve por objectivo aplicar técnicas de análise molecular, utilizando marcadores moleculares RAPDs e ISSRs, e técnicas de análise química, como a Cromatografia Gás-líquido e a Cromatografia Gás-Líquido associada a Espectrometria de Massa, para a caracterização de três espécies aromáticas endémicas da flora Portuguesa: Juniperus brevifolia, Laurus azorica e Thymus caespititius. Na tentativa de entender a razão da elevada diversidade química presente em Th. caespititius, deu-se início a uma abordagem molecular mais direccionada através da análise de terpeno sintases, recorrendo para o efeito a ferramentas de Bioinformática. A análise dos componentes voláteis permitiu corroborar e acrescentar dados aos estudos anteriores referentes às três espécies em questão. A caracterização molecular por RAPDs e ISSRs para as espécies J. brevifolia e L. azorica provenientes de sete ilhas açorianas, é aqui reportada pela primeira vez, tendo-se verificado uma semelhança genética moderada entre os indivíduos, resultante do polimorfismo detectado. Relativamente a Th. caespititius, espécie caracterizada pela existência de quimiotipos, o perfil de bandas obtido revelou uma baixa semelhança genética entre todos os indivíduos. Para as três espécies em questão, a similaridade genética detectada permitiu agrupar os indivíduos maioritariamente pela sua localização geográfica, não tendo sido possível estabelecer uma boa correlação entre os dados moleculares e os dados químicos. Apesar da caracterização com os marcadores moleculares utilizados ter revelado existência de diversidade genética nas espécies endémicas, estes não mostraram ser os mais indicados para revelar correlações com os óleos essenciais. Abordagens moleculares mais específicas, como o estudo das terpeno sintases (TPS) foram iniciadas para o Th. caespititius, sendo reportados pela primeira vez resultados parciais sobre o conteúdo do genoma da espécie. Sendo pioneiros, estes dados da sequenciação parcial do gene remetem para a existência de variação genética intraespecífica, desconhecendo-se, até ao momento, não só em que parte do gene é que esta sequência se localiza, mas também qual a sua função exacta.

The aim of the present work was the molecular (RAPD and ISSR markers) and chemical (GC and GC-MS techniques) characterization of three Portuguese aromatic species, Juniperus brevifolia, Laurus azorica e Thymus caespititius. A more targeted molecular approach on terpene synthases, using bioinformatics tools, was initiated in order to determine the reason for the high chemical diversity present in Th. caespititius, The herewith reported volatile oil composition results, obtained from individual samples, are in accordance with previous studies and new data is included for the three species. The molecular RAPD and ISSR markers characterization of J. brevifolia and L. azorica from seven Azorean islands are reported for the first time. These data suggest a moderate genetic similarity between individuals as result of the polymorphism detected. Characterized by the presence of chemotypes, Th. caespititius band profile showed a low genetic similarity between all individuals. The genetic similarity found for the three aromatic species grouped individuals mainly by its geographical location, and no straight correlation could be found between the molecular and volatiles clusters. Although the molecular characterization revealed the existence of genetic diversity, the molecular markers used did not show correlation with volatile analysis. Terpene synthases studies were performed for Th. caespititius, and for the first time partial results on the genome content of this species are reported. These results on the partial gene sequence show intraspecific genetic variation, being unknown until present the sequence localization in the gene and its function.

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