Desenvolvimento de um sistema de cultura in vitro de células lúteas bovinas para estudar as interacções com embriões em co-cultura

• Autor(es): Batista, Mariana Raposo
• Data: 2011
• Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10400.5/4325
• Origem: Repositório da UTL
• Assunto(s): Células lúteas; Cultura in vitro; Embrião; co-cultura; Progesterona; Bovino; luteal cells; in vitro culture; embryo; co-culture; progesterone; bovine
• Tipo de Documento: Dissertação de mestrado
• Idioma: Português
• Orientador(es): Costa, Luís Filipe Lopes da
• Contribuidor(es): Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

O objectivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um sistema de cultura in vitro de células lúteas bovinas, compatível com o sistema de cultura in vitro de embriões bovinos, para estudar as suas interacções, relevantes para o estabelecimento da gestação nos mamíferos. As células foram obtidas pela digestão de corpos lúteos (CL) pela colagenase, seguida de centrifugações em gradiente de Percoll® e centrifugações a velocidades decrescentes. Foram estudados os efeitos do estadio do CL do qual provêem as células lúteas, meio de cultura, concentração de soro no meio de cultura, tensão de oxigénio na atmosfera de cultura, criopreservação e cobertura da cultura com óleo mineral sobre a produção de progesterona (P4) pelas células lúteas em cultura. A P4 foi quantificada por radioimunoensaio. Verificou-se que o estadio do CL teve efeito significativo na P4 produzida, assim como a refrescagem do meio para as células provenientes do estadio early. Não se verificaram efeitos significativos dos restantes factores estudados. O óleo reduz cerca de 50× a P4 quantificada no meio. O sistema de cultura in vitro aqui desenvolvido apresenta as condições requeridas para a co-cultura de embriões.

ABSTRACT - Development of an in vitro culture system for bovine luteal cells which allow the study of embryo interactions in co-culture - The objective of this work was to develop an in vitro culture system for bovine luteal cells, compatible with embryo in vitro culture systems, to allow the study of their interactions, which are relevant for the establishment of mammalian pregnancy. The cells were obtained by collagenase digestion of the corpus luteum (CL), followed by Percoll® gradient centrifuges and decreasing speed centrifuges. The effects of the stage of the CL of origin, culture medium, serum concentration in the culture medium, oxygen tension in the culture atmosphere, cryopreservation and mineral oil overlaying of the culture wells were evaluated on the luteal cells’ ability to produce progesterone (P4). P4 was quantified by radioimmunoassay. From the above, the effects of the stage of the CL and of the refreshing of the culture medium in the cells of the early CL were significant. Oil overlaying reduced about 50× the P4 quantified in the medium. The luteal cell in vitro culture system here developed is able to support the required conditions for embryo co-culture sessions.