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Made available in DSpace on 2015-04-11T13:55:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Pereira de Sousa.pdf: 2276123 bytes, checksum: a079176d073fb54e951e38fb4291c529 (MD5) Previous issue date: 2012-11-12

Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior

Malaria is one of the most serious public health problems in the world, accounting for high morbidity and mortality. The diagnosis remains the most widely used microscopy, however this approach requires adequate infrastructure and highly skilled professionals for the exams, making it unfeasible in areas of difficult access. Tests for the rapid and simple diagnosis of malaria are commercially available, but none of national origin, complicating the deployment by the Unified Health System (SUS). Faced with this problem, this study has as main objective the production of Plasmodium vivax Lactate Dehydrogenase (pLDH), aiming at the development of polyclonal antibodies anti-LDH able to detect the native antigen in blood samples from patients infected with the intention of offering future perspectives for the development of a rapid diagnostic test for malaria. For this, pvLDH protein was produced by recombinant DNA technology in host cells chemically competent. Therefore, it was purified to inoculation into rabbits and mice Balb /c. The response of the inoculated animals as well as the performance of polyclonal antibodies anti-LDH in the recognition of native antigen were assessed by ELISA immunoassays and sandwich system, respectively. The animals showed good antibody titers anti-pLDH after the third inoculation of the recombinant protein pLDH, and the rabbit antibody response than the response of mice with absorbance values at dilution 1/100, 2,600 and 2,100, respectively. Polyclonal antibodies anti-pLDH were able to recognize the native protein pLDH 131 samples to 154 samples positive malaria and incapable of recognizing human isoforms of LDH when evaluated against malaria negative samples, since the 23 negative samples evaluated, all also remained negative during the tests. The proposal idealized in this study proved extremely viable and promising. The results of this study meet expectations and provided future prospects as regards the use of recombinant pvLDH for the development of polyclonal and monoclonal antibodies functional in murine model for use in rapid diagnostic test (RDT) for malaria in attempt to offer alternatives to diagnosis in Brazil, or for use in immunoassay targeting the monitoring of the disease course.

A mal??ria ?? um dos mais s??rios problemas de sa??de p??blica do mundo, sendo respons??vel por elevada morbidade e mortalidade. O diagn??stico mais utilizado continua sendo a microscopia, contudo esta metodologia exige infraestrutura adequada e profissionais altamente qualificados para a realiza????o dos exames, tornando-se invi??vel em ??reas de dif??cil acesso. Testes para o diagn??stico r??pido e simples de mal??ria est??o dispon??veis no mercado, por??m nenhum de origem nacional, dificultando a implanta????o pelo Sistema ??nico de Sa??de (SUS). Diante desta problem??tica, o presente estudo tem como principal objetivo a produ????o de Lactato Desidrogenase de Plasmodium vivax (pvLDH), visando o desenvolvimento de anticorpo os policlonais anti-LDH capazes de detectar o ant??geno nativo em amostras sangu??neas de pacientes infectados com a pretens??o de oferecer perspectivas para a elabora????o de um teste diagn??stico r??pido para a Mal??ria. Para isto, a prote??na pvLDH foi produzida pela tecnologia do DNA recombinante em c??lulas hospedeiras quimicamente competentes. Logo, a prote??na foi purificada para a imuniza????o de coelho e camundongos Balb/c. A resposta dos animais as inocula????es assim como o desempenho dos anticorpos policlonais anti-LDH no reconhecimento do ant??geno nativo foram avaliados por ensaios imunoenzim??ticos ELISA indireto e em sistema sandu??che, respectivamente. Os animais demonstraram boa resposta de anticorpos anti-pvLDH ap??s a terceira imuniza????o de prote??na recombinante, sendo a resposta de anticorpos do coelho superior a resposta dos camundongos, com valores de absorb??ncia de at?? 2.600 e 2.100, respectivamente. Os anticorpos policlonais anti-pvLDH foram capazes de reconhecer a prote??na LDH nativa em 131 amostras de 154 amostras positivas para mal??ria e incapazes de reconhecer isoformas de LDH humana quando avaliados em rela????o a amostras negativas para mal??ria, uma vez que das 24 amostras negativas avaliadas, todas se mantiveram tamb??m negativas nos ensaios. A proposta idealizada neste trabalho se mostrou extremamente vi??vel e promissora. Os resultados obtidos neste estudo corresponderam ??s expectativas e forneceram perspectivas futuras no que diz respeito ?? utiliza????o da pvLDH recombinante para a produ????o de anticorpos policlonais e monoclonais funcionais, em modelo murino, para a utiliza????o em teste diagn??stico r??pido (TDR) para a mal??ria, na tentativa de oferecer alternativas ao diagn??stico no Brasil, ou para a utiliza????o em imunoensaio visando o monitoramento do curso da doen??a.