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Os probióticos são microrganismos vivos caracterizados como alimento funcional que desempenham papel fundamental na promoção a saúde. O kefir é muito utilizado na atualidade, é considerada uma bebida láctea fermentada elaborada a partir dos grãos de kefir. Estudos destacam atividade deste probiótico no tratamento de doenças intestinais; propriedade antimicrobiana também é relatada através dos efeitos dos lactobacillus do kefir frente a E. coli. O objetivo do presente trabalho foi realizar a caracterização físico-química e avaliar a atividade antimicrobiana de kefir frente a cepas de Escherichia coli NEWP 0022. Foram coletados dois kefir de diferentes domicílios, e analisados durante seis dias verificando sua ação. Utilizando a metodologia de Dornic (teste de acidez titulável) e o teor de glicídios redutores em lactose; e avaliação antimicrobiana pelo método de difusão em poços. O kefir “A”  e “B” apresentaram aumento gradual de ácido láctico e diminuição de lactose pós analises. Quando avaliado sua atividade antibacteriana notou-se que o kefir não apresentou ação inibitória à cepas de E. coli NEWP 0022.