Author(s):
do Nascimento, Williamis
Date: 2014
Origin: Oasisbr
Subject(s): Geléia de Wharton; Células tronco mesenquimais; Canais iônicos; Patch-clamp; Tetraetilamônio (TEA); 4-Amonopiridina (4-AP); Glibenclamida (GB); 5-Nitro-2-(3-fenilpropilamino) ácido benzóico (NPPB); Geléia de Wharton; Geléia de Wharton; Células tronco mesenquimais; Células tronco mesenquimais; Canais iônicos; Canais iônicos; Patch-clamp; Patch-clamp; Tetraetilamônio (TEA); Tetraetilamônio (TEA); 4-Amonopiridina (4-AP); 4-Amonopiridina (4-AP); Glibenclamida (GB); Glibenclamida (GB); 5-Nitro-2-(3-fenilpropilamino) ácido benzóico (NPPB); 5-Nitro-2-(3-fenilpropilamino) ácido benzóico (NPPB)
Description
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
A caracterização de canais iônicos em células tronco é importante pelo fato destas estruturas atuarem no controle da proliferação e diferenciação destas células. Há poucos trabalhos focados nos canais iônicos presentes nas membranas plasmáticas das células tronco e nenhum deles trata das células tronco mesenquimais da geléia de Wharton do cordão umbilical humano (whMSC). O cordão umbilical é uma fonte importante de células tronco para tão esperada terapia celular. Estes fatos motivaram o estudo dos canais iônicos das whMSC como objetivo maior do presente trabalho. Foi utilizada a técnica de patch-clamp na configuração whole-cell e a atuação de inibidores específicos para identificar os canais iônicos presentes nas whMSC. Os inibidores escolhidos foram: tetraetilamonio (TEA) e 4-aminopiridina (4-AP) como inibidores de canais de potássio dependentes de voltagem e de Ca2+, Glibenclamida (GB) um inibidor de canais de potássio dependentes de ATP, canais aniônicos dependentes de volume celular e CFTR e 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino) ácido benzóico (NPPB) um potente bloqueador dos canais de cloreto, mas que também é capaz de bloquear os canais de potássio dependentes de Ca2+ de condutância intermediária. Os resultados mostraram que as correntes iônicas ativadas por voltagem das whMSC podem ser bloqueadas consideravelmente por TEA (10 mM), 4-AP (5 mM) e NPPB (100 μM) indicando a presença dos canais de K+ dependentes de voltagem e de Ca2+ e de canais de Cl- dependentes de voltagem conforme descrito para células tronco de outras origens. Utilizando GB (100 μM) observamos um aumento (estimulação) significativo da corrente. Este é um resultado inédito, pois estudos anteriores demonstram que o GB atua inibindo a corrente iônica transmembrana. Em todos os casos, com todos os inibidores testados, os efeitos foram reversíveis. Estes resultados demonstram que as membranas citoplasmáticas das whMSC possuem canais de K+ dependentes de voltagem e de Ca2+ e canais de Cl- dependentes de voltagem. O surpreendente efeito da glibenclamida indica a presença de canais iônicos desconhecidos nas membranas das whMSC
