Document details

CAPES

Queratinases (EC: 3.4.99) são amplamente utilizadas na indústria durante o processamento do couro, na produção de detergentes, assim como aplicadas na medicina e cosmética para remoção de calosidades. Elas são produzidas por diversos microrganismos, entre eles, o gênero Cunninghamellatem se mostrado promissor entre os fungos filamentosos. Desta forma, este trabalho teve como objetivo produzir, quantificar, caracterizar e purificar as queratinases obtidas pelos fungos Cunninghamella echinulata UCP 1299 e Cunninghamella phaeosphora UCP 1303 isolados do solo da Caatinga. Os microrganismos foram mantidos em meio sólido mineral específico contendo queratina extraída de penas de ave como única fonte de Carbono e Nitrogênio por 15 dias e usado posteriormente na fermentação submersa para a determinação quantitativa da produção enzimática. O cultivo foi realizado durante 15 dias, a 28°C em agitador orbital a 150 rpm. A cada três dias foram retiradas alíquotas para avaliar a concentração proteica, atividade queratinolítica e variação do pH durante a produção. Os isolados apresentaram uma elevada atividade específica de 84,1 U/mg para C. echinulata UCP 1299 no 9º dia de cultivo e de 96,2 U/mg para C. phaeosphoraUCP 1303 no 6º dia de cultivo, onde ambos extratos brutosforam utilizados para a caracterização parcial da enzima. As queratinases da C. echinulata UCP 1299e C. phaeosphora UCP 1303apresentaram valores com maior atividade no pH e temperatura de 8,0 e 28ºC – 45ºC; 9,0 e 35ºC – 55ºC, respectivamente. As queratinases, com massa molecular de aproximadamente 35 KDa foram purificadas por cromatografia de afinidade empregando partículas do compósito magnetita-queratina obtendo um fator de purificação de 37,4% e 44,1% para C. echinulata UCP 1299e C. phaeosphora UCP 1303 respectivamente. Deste modo, ambos os microrganismos podem ser utilizadospara produzir queratinase que pode ser purificada por afinidade utilizando a queratina magnetizada.

Keratinases (EC: 3.4.99) is widely used in the industry for leather processing, detergent production, so as applied in medicine and cosmetics for removing calluses. Various microorganisms, including the genus Cunninghamella, have shown to produce these enzymes. Thus, this study aimed to produce, quantify, characterize and purify keratinases obtained by fungi Cunninghamella echinulata UCP 1299 and Cunninghamella phaeosphora UCP 1303 isolated from soil of Caatinga (Pernambuco, Brazil). The microorganisms were maintain on solid medium, containing keratin bird feathers as the sole source of carbon and nitrogen, for 15 days and subsequently used in submerged fermentation for the enzyme production. Cultures it grown for 15 days at 28°C in an orbital shaker at 150 rpm. Every three days aliquots it collected to assess the protein concentration, keratinase activity and pH variation during production. The isolates showed a high specific activity of 84.1 U / mg for C. echinulata UCP in 1299 on the 9th day of cultivation and 96.2 U / mg for C. phaeosphora UCP 1303 on the 6th day of cultivation, where both crude extracts were used for partial characterization of the enzyme.Keratinases from C. echinulata UCP 1299and C. phaeosphora UCP 1303showed best activity in pH and temperature values of 8.0 and 28°C-45°C; 9.0 and 35°C-55°C, respectively. The keratinases, with a molecular mass of approximately 35 kDa were purify by affinity chromatography using particles of a composite magnetite-keratin obtaining a purification factor of 37.4% and 44.1% for C. echinulataUCP 1299 and C. phaeosphoraUCP 1303 respectively. Thus, both microorganisms can be used to produce keratinase can be affinity purified using magnetized keratin.