Publicação
Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
| Resumo: | A somitogénese é um processo característico do desenvolvimento embrionário dos vertebrados durante o qual segmentos repetidos, denominados somitos, são gerados de forma periódica, sob o controlo temporal imprimido por um Relógio Molecular, primeiramente descrito pela expressão cíclica do gene hairy1. O nosso laboratório identificou uma interacção proteica entre Hairy1 e Brachyury (T), um marcador de identidade mesodérmica. T regula e é regulado pela sinalização FGF e desempenha um papel fundamental na activação da expressão dos genes de identidade Hox. Este resultado levantou a hipótese de que Hairy1 e T interagem ao longo do desenvolvimento, aliando informação temporal e posicional. Para prosseguir o estudo desta hipótese, neste trabalho realizou-se a caracterização da interacção proteica entre Hairy1 e T in vivo por Bimolecular Fluorescent Complementation (BiFC), identificando a sua localização subcelular e os domínios proteicos envolvidos. Os resultados mostram que o dímero T:Hairy1 é exclusivamente nuclear, que a homodimerização de Hairy1 ocorre no núcleo e no citoplasma, e sugerem que a porção bHLHOR é suficiente para estas interacções. Os padrões de expressão de hairy1 e T apresentam domínios de co-expressão ao longo do desenvolvimento, corroborando um possivel papel funcional para a interacção entre as duas proteínas. Observou-se que a expressão de T apresenta um gradiente de mRNA na mesoderme pré-somitica (PSM), sendo que o seu dominio de transcrição activa se revelou mais restrito ao botão caudal, assim como foi descrito para fgf8. A caracterização da dinâmica temporal da expressão de T e fgf8 revelou que estes genes apresentam pulsos de transcrição, com periodicidade diferente de 90min. Verificou-se ainda que a ausência da notocorda por 90min e 4,5h, provoca uma diminuição da transcrição e da expressão de mRNA maduro em T e fgf8, sendo mais acentuada para fgf8. Globalmente, estes resultados sugerem que T e fgf8 possuem mecanismos de regulação da expressão na PSM muito semelhantes. |
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| Autores principais: | Amaro, Joana Paula Gomes, 1988- |
| Assunto: | Embriologia animal Biologia celular Teses de mestrado - 2012 |
| Ano: | 2012 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | A somitogénese é um processo característico do desenvolvimento embrionário dos vertebrados durante o qual segmentos repetidos, denominados somitos, são gerados de forma periódica, sob o controlo temporal imprimido por um Relógio Molecular, primeiramente descrito pela expressão cíclica do gene hairy1. O nosso laboratório identificou uma interacção proteica entre Hairy1 e Brachyury (T), um marcador de identidade mesodérmica. T regula e é regulado pela sinalização FGF e desempenha um papel fundamental na activação da expressão dos genes de identidade Hox. Este resultado levantou a hipótese de que Hairy1 e T interagem ao longo do desenvolvimento, aliando informação temporal e posicional. Para prosseguir o estudo desta hipótese, neste trabalho realizou-se a caracterização da interacção proteica entre Hairy1 e T in vivo por Bimolecular Fluorescent Complementation (BiFC), identificando a sua localização subcelular e os domínios proteicos envolvidos. Os resultados mostram que o dímero T:Hairy1 é exclusivamente nuclear, que a homodimerização de Hairy1 ocorre no núcleo e no citoplasma, e sugerem que a porção bHLHOR é suficiente para estas interacções. Os padrões de expressão de hairy1 e T apresentam domínios de co-expressão ao longo do desenvolvimento, corroborando um possivel papel funcional para a interacção entre as duas proteínas. Observou-se que a expressão de T apresenta um gradiente de mRNA na mesoderme pré-somitica (PSM), sendo que o seu dominio de transcrição activa se revelou mais restrito ao botão caudal, assim como foi descrito para fgf8. A caracterização da dinâmica temporal da expressão de T e fgf8 revelou que estes genes apresentam pulsos de transcrição, com periodicidade diferente de 90min. Verificou-se ainda que a ausência da notocorda por 90min e 4,5h, provoca uma diminuição da transcrição e da expressão de mRNA maduro em T e fgf8, sendo mais acentuada para fgf8. Globalmente, estes resultados sugerem que T e fgf8 possuem mecanismos de regulação da expressão na PSM muito semelhantes. |
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