Publicação
3-hydroxy-V-coumarin hydrolysis study through fluorometry and LC-MS analysis
| Resumo: | As cumarinas são uma classe de lactonas presentes na natureza, com uma estrutura resultante da fusão de um anel benzénico com uma α-pirona. Estes compostos exibem uma ampla variedade de propriedades terapêuticas, tendo despertado o interesse da indústria farmacêutica nos últimos anos. A sua estrutura e caraterísticas físico-químicas possibilitam a formação de inúmeros derivados sintéticos que funcionam como scaffolds privilegiados, capazes de atingir objetivos terapêuticos específicos em diversas doenças. As cumarinas π-expandidas revelam características espectrofotométricas específicas, tais como maior deslocamento de Stokes e atributos colorimétricos. Estas características atraíram os investigadores, o que levou ao desenvolvimento da 3-hidroxi-V-cumarina, cujo metabolismo e potencial terapêutico nunca foram estudados. A identificação e caracterização de metabolitos nas fases iniciais do desenvolvimento de fármacos é crucial para avaliar os seus efeitos farmacológicos e toxicológicos, o que auxilia na exclusão precoce de candidatos tóxicos ou não efetivos. Por isso, este trabalho de investigação teve como propósito o estudo da hidrólise da 3-hidroxi-V cumarina e dos seus metabolitos. Para verificar a variação da quantidade da 3-hidroxi-V-cumarina na presença de citosol foi utilizado o método espectrofluorimétrico, uma vez que este composto apresenta fluorescência. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa, foi a técnica analítica eleita para corroborar os resultados obtidos por fluorimetria e para detetar e identificar os metabolitos resultantes da hidrólise da 3-hidroxi-V-cumarina, uma vez que apresenta elevada sensibilidade e seletividade. Foi também investigada a influência de parâmetros físicos nomeadamente o pH na hidrólise da 3-hidroxi-V-cumarina. Este projeto incluiu o estudo da cinética desta reação de hidrólise com a determinação dos parâmetros cinéticos na presença de citosol hepático humano, bem como a comparação das atividades enzimáticas entre diferentes espécies. Este projeto compreendeu a fase inicial do estudo do metabolismo da 3-hidroxi-V-cumarina, com foco na reação de hidrólise que se previa ocorrer tendo em conta a estrutura química do composto. Estudos posteriores de metabolismo serão conduzidos, nomeadamente estudos das reações de fase II, de forma a complementar a informação obtida neste trabalho. |
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| Autores principais: | Ferreira, Margarida Sofia Bento |
| Assunto: | 3-hydroxy-V-coumarin Hydrolysis Fluorometry Liquid Chromatography Mass spectrometry Mestrado Integrado - 2023 |
| Ano: | 2023 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | As cumarinas são uma classe de lactonas presentes na natureza, com uma estrutura resultante da fusão de um anel benzénico com uma α-pirona. Estes compostos exibem uma ampla variedade de propriedades terapêuticas, tendo despertado o interesse da indústria farmacêutica nos últimos anos. A sua estrutura e caraterísticas físico-químicas possibilitam a formação de inúmeros derivados sintéticos que funcionam como scaffolds privilegiados, capazes de atingir objetivos terapêuticos específicos em diversas doenças. As cumarinas π-expandidas revelam características espectrofotométricas específicas, tais como maior deslocamento de Stokes e atributos colorimétricos. Estas características atraíram os investigadores, o que levou ao desenvolvimento da 3-hidroxi-V-cumarina, cujo metabolismo e potencial terapêutico nunca foram estudados. A identificação e caracterização de metabolitos nas fases iniciais do desenvolvimento de fármacos é crucial para avaliar os seus efeitos farmacológicos e toxicológicos, o que auxilia na exclusão precoce de candidatos tóxicos ou não efetivos. Por isso, este trabalho de investigação teve como propósito o estudo da hidrólise da 3-hidroxi-V cumarina e dos seus metabolitos. Para verificar a variação da quantidade da 3-hidroxi-V-cumarina na presença de citosol foi utilizado o método espectrofluorimétrico, uma vez que este composto apresenta fluorescência. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa, foi a técnica analítica eleita para corroborar os resultados obtidos por fluorimetria e para detetar e identificar os metabolitos resultantes da hidrólise da 3-hidroxi-V-cumarina, uma vez que apresenta elevada sensibilidade e seletividade. Foi também investigada a influência de parâmetros físicos nomeadamente o pH na hidrólise da 3-hidroxi-V-cumarina. Este projeto incluiu o estudo da cinética desta reação de hidrólise com a determinação dos parâmetros cinéticos na presença de citosol hepático humano, bem como a comparação das atividades enzimáticas entre diferentes espécies. Este projeto compreendeu a fase inicial do estudo do metabolismo da 3-hidroxi-V-cumarina, com foco na reação de hidrólise que se previa ocorrer tendo em conta a estrutura química do composto. Estudos posteriores de metabolismo serão conduzidos, nomeadamente estudos das reações de fase II, de forma a complementar a informação obtida neste trabalho. |
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