A Importância da Autofagia na Apresentação de Antígenos de Cryptococcus neoformans por Macrófagos.

• Author(s): Gorgonha, Kaio César de Melo
• Date: 2015
• Origin: Oasisbr
• Subject(s): Biomedicina; Autofagia; Antígenos; Cryptococcus
• Document Type: Bachelor thesis
• Language: Portuguese

Description

Biomedicina

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Cryptococcus neoformans é uma levedura encapsulada causadora de meningoencefalite oportunista. Estima-se que mais de 650.000 pessoas morram por ano em decorrência da criptococose, a maioria em países em desenvolvimento Os macrófagos são as principais células efetoras do sistema imune na resposta contra C. neoformans, eles fagocitam, apresentam antígenos e secretam citocinas na tentativa de montar uma resposta imune e controlar a disseminação sistêmica do fungo. A autofagia é um processo pelo qual células eucarióticas reciclam material intracelular. O processo de iniciação é feito por uma bicamada lipídica chamada fagóforo que tem o objetivo de englobar o componente citoplasmático a ser reciclado. Depois do fechamento completo essa membrana recebe o nome de autofagossomo, que irá se fundir com um lisossomo resultando na degradação do material englobado. Trabalhos recentes com vários tipos de microrganismo mostram que as atividades efetoras de macrófagos, como a fagocitose, atividade antimicrobiana, secreção de citocinas e apresentação de antígenos, são influenciadas pela autofagia. No modelo de criptococose, especificamente, já se demonstrou que a autofagia tem um papel na atividade fungistática do macrófago e na sua produção de citocinas. A hipótese de trabalho da linha de pesquisa na qual este trabalho de conclusão de curso se insere é que a autofagia também está envolvida na outra atividade de macrófagos contra C. neoformans: a apresentação de antígenos. Para testar essa hipótese, será feito um experimento com macrófagos nos quais a maquinaria autofágica foi desligada por meio de RNA de interferência contra um gene envolvido na formação de autofagossomos, o ATG5. Além de gerar estes macrófagos, é necessário produzir uma proteína recombinante de C. neoformans chamada MP98, um excelente antígeno para ativação de células T. Espera-se que, na falta de autofagia nos macrófagos, a apresentação de MP98 medida pela produção de IL-2 por células T seja diminuída. O objetivo deste plano de trabalho foi gerar as ferramentas necessárias para que este complexo experimento possa ser realizado. Macrófagos com interferência na expressão do gene ATG5 foram gerados por transdução de vetores lentivirais contendo shRNA contra o gene. A proteína MP98 foi produzida por expressão heteróloga em Pichia pastoris, purificada por cromatografia de afinidade em colunas de níquel-NTA e quantificada por espectrofotometria. Estas ferramentas experimentais foram obtidas com sucesso em quantidade e qualidade suficientes para o andamento da linha de pesquisa.