Estudo preliminar sobre o sistema RNA-RNase em hepatopâncreas de lagosta jovem Panulirus laevicauda (Latreille)

• Autor(es): Sampaio, Alexandre Holanda
• Data: 2019
• Origem: Oasisbr
• Assunto(s): Lagostas
• Tipo de Documento: Monografia de licenciatura
• Idioma: Português

Descrição

0 presente trabalho objetivou determinar as condigoes timas do sistema RNA-RNase, bem como as caracterlsticas basicas da enzima RNase em -hepatopancreas e sua rela gao com os estagios de muda de lagosta jovem Panulirus laevicauda (Latreille). 0 hepatopancreas foi retirado das lagostas vivas, estocadas em aquarios no Laboraterio de Ciencias do Mar, capturadas nas praias do Meireles e Titanzinho (Fortaleza - Ceara). •A determinagão dos estagios de muda, seguiu-se o modelo de DRACH (1939) segundo TRAVIS (1955 a), observando--se tambem o tamanho. Todos os ensaios eazimaticos e determinagao de proteínas foram realizados em lagosta no estigio. C, exceto aqueles correlacionando o estagio de muda e/ou teor de protema. 0 extrato de hepatopancreas foi obtido por homogeneizagao com tampão fosfato 0,1 ml pH 5,7 sob banho de gelo na proporgao de 1:10 (p : v), centrifugando-se por 10 minutos a 3.000 rpm a 4°C. 0 sobrenadante foi levado a pH 5,1 com HC1 0,5 N e deixado em repouso por uma noite em geladeira. Centrifugou-se novamente nas mesmas condiç-Oes desprezando-se o precipitado. A atividade ribonucleasica foi determinada pela capacidade de hidrolizar acido ribonucleico (RNA), na razão de 0,8 mg de RNA a-0,1% dissolvido em tampão pH 6,2 para 0,2 ml do extrato de hepatopancreas. A reação procedeu-se a temperatura de 45oC durante 30 minutos, sendo parada por adiço de acetato de uranila (0,5 ml) a 0,75% em HCl 25% (TUVE & ANFINSEN, 1960). Apes 10 minutos de repouso, obteve-se um sobrena dante por centrifugagao a 3.000 rpm, por 10 minutos, o qual foi lido a 260 nm em espectrofot-Ometro. A caracterização basica da enzima relacionou-se com a determinaçao do pH Otimo, tempo e temperatura de reagao, relaçao enzima substrato, termo estabilidade e condigo 6tima de extrato de enzima. 0 pH Otimo de reaçao observado apresentou dois maximos (pH 5,2 e 8,0), supondo-se a presença de mais de uma enzima. Observou-se que na relaçao enzima substrato, 0,8 mg de RNA (0,1%) foi suficiente para Haver o excesso de substrato exigido para as condig3es timas de reagao. 0 tempo de reagao foi determinado nas temperaturas de 40 a 45°C, detendo-se o valor otimo em 30 minutos a 45°C de incubação. A enzima ribonuclease, quanto a termo-estabilidade, mostrou seu decrescimo maxim° aos 60 minutos, quando perdeu 79% de sua atividade. 0 pH 5,0, foi o pH aim° de extraqao da enzima,correspondendo aquele valor de melhor eficiencia de extraçao da RNase, em relaçao a atividade especifica. A concentraçao de sulfato de amnia ideal para a purificaçao de enzima foi de 60 - 80% com incremento na purl ficação de 18 vezes do extrato bruto. A atividade especifica ribonucleasica apresentou- -se tima no estagio C e minima no. estagio D. Quanto a classes de comprimento o maxim° de atividade foi no intervalo de 12 a 13 cm e o mil-limo de 8a 9 cm. A concentraçao de proteína no hepatopancreas foi maxima no estagio TY e classe de comprimento de 8 - a cm e mi nimo no estagio C e classe de comprimento 12 - 13 cm. A maior concentraçao de RNA foi obtida no estagio C e menor no estagio A.