O arroz absorve o As de forma mais eficiente do que outros cereais, em resultado das condições de anaerobiose em que é cultivado. Dada a importância que este cereal tem na alimentação humana, torna-se imperativo reduzir a acumulação de As neste alimento. Por outro lado a qualidade e a conservação dos solos tem vindo a ser uma prioridade, pelo que é extremamente importante fomentar uma gestão sustentável do recurso solo. De modo a avaliar a qualidade de solos com culturas de arroz, procedeu-se à quantificação das actividades enzimáticas da fosfatase, arilsulfatase, -glucosidase, desidrogenase e urease, em amostras de solo e estudou-se a sua modulação na presença de As (III). Na caracterização bioquímica do solo, a quantidade de proteína para as diferentes parcelas de solo variou entre 0,38 e 0,42 mg/g. As actividades enzimáticas fosfatase, arilsulfatase, - glucosidase, desidrogenases e urease foram de 8,0 - 21,5 μmol /h/g, 1,6 -3,7 μmol /h/g, 2,5 - 4,7 μmol /h/g, 21,2 - 65,5 μmol /h/g e 3,9 e 36,0 μmol /h/g, respectivamente. O estudo de modulação das actividades enzimáticas pelo As revelou que as atividades enzimáticas em estudo apresentam sensibilidade ao As(III) e que este apresentou toxidades para todos os marcadores de qualidade do solo estudados, tendo-se obtido valores IC50 – concentração de As(III) correspondente a inibição de 50% de atividade – compreendidos entre os 126 e 1216 ppm.

There is considerable interest in alternative approaches for the eradication of Helicobacter pylori using biologically active compounds including antioxidants from a wide range of natural sources. In this work we have investigated the antibacterial properties of resveratrol towards different H. pylori strains. In addition we studied the inhibition of H. pylori urease by resveratrol and red wine. In those assays, resveratrol inhibited the growth of all the 17 H. pylori strains tested, with inhibition diameters ranging from 16 to 28 mm and minimum inhibitory concentration values varying from 25 to 100 mu g/mL, confirming its antimicrobial properties. Moreover, resveratrol and red wines showed an inhibitory effect on H. pylori urease activity, which is considered a virulence factor of this organism and essential for colonization and establishment of the infection. Further kinetic analysis revealed that inhibition occurred in a non-competitive and concentration-dependent manner. Overall, the results suggest that resveratrol and red wine may have potential for new therapy schemes that include natural products as an alternative therapeutic approach.

As actividades das enzimas no solo são um importante indicador da sua qualida­de. Neste estudo procedeu-se à caracteri­zação da actividade enzimática de desi­drogenases (EC 1.1.1) e da urease (EC 3.5.1.5) de um solo sob Olea europeae L. da região de Évora. As constantes cinéti­cas Km e Vmáx, foram determinadas usando como substratos o cloreto de p­-iodonitrotetrazolio (INT) e a ureia, res­pectivamente. Foi avaliado o efeito nas referidas actividades provocado pelo pH, temperatura e vestígios de Hg2+ e de Pb2+. As actividades máximas obtiveram-se a pH = 8,5 e 40 ºC, com Km= 0,5 mM e Vmáx = 5,4 µmol min-1 g-1, para a activida­de de desidrogenases e a pH = 10 e 37 ºC, com Km = 25,7 mM e Vmáx = 2,0x10-2 µmol min-1 g-1, para a urease. Estas acti­vidades foram inibidas por diferentes concentrações de Hg2+, mas apenas a acti­vidade da urease foi inibida pelo Pb2+. Estes resultados são comparáveis com os referidos na literatura para estes enzimas.

Reconhece-se actualmente que o vinho tem propriedades benéficas no organismo humano, sendo constituído por compostos que exercem uma influência positiva no metabolismo dos indivíduos que o consomem com regularidade e moderação. O resveratrol (trans-3,4’,5-trihidroxiestilbeno) é uma fitoalexina que está presente em diversos alimentos e bebidas, em particular no vinho tinto. Das várias classes de polifenóis existentes no vinho, o resveratrol (estilbeno) é um dos compostos mais estudados do ponto de vista de importância biológica, devido aos potenciais efeitos benéficos para a saúde humana. Na primeira parte deste trabalho foi desenvolvido e validado um método analítico sensível, com vista a determinar, quantitativamente, as concentrações de resveratrol em amostras de vinhos tintos portugueses, utilizando a extracção em fase sólida (SPE) e a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de díodos (HPLC-DAD). Na segunda parte, foram implementadas técnicas, tais como, o método de difusão em disco e o método da microdiluição, que permitiram avaliar a actividade antimicrobiana do resveratrol em diversos microrganismos, nomeadamente bactérias Gram-positivas (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli, Klebsiella pnemoniae, Salmonella typhimurium e Pseudomonas aeruginosa). O efeito do resveratrol em bactérias Gram-positivas foi também analisado, recorrendo-se às curvas de morte, de forma a tentar assim compreender se o resveratrol actua como um agente bactericida ou bacteriostático. Analisou-se, ainda, a acção do resveratrol em Bacillus cereus, recorrendo à microscopia e à citometria de fluxo, de forma a tentar compreender o mecanismo de acção deste composto. Finalmente, foi também avaliada a actividade antimicrobiana do resveratrol em diferentes estirpes de Helicobacter pylori, utilizando o método da difusão em disco e o método da diluição em agar. Para além disso, verificou-se a hipótese do resveratrol e amostras de vinho tinto (devidamente quantificadas na primeira parte deste trabalho) inibirem a actividade da urease de H. pylori, considerada um dos principais factores de virulência deste microrganismo. Complementou-se, ainda, o estudo analisando cineticamente a actividade da urease na presença do resveratrol. O método analítico foi validado de acordo com normas internacionalmente aceites quanto a: especificidade, linearidade, limites de detecção (LOD) e de quantificação (LOQ), precisão, exactidão, estabilidade e eficiência de extracção. Verificou-se ainda a aplicabilidade do método, analisando 186 amostras de vinhos tintos comerciais, provenientes de diferentes regiões, castas e anos. Os resultados obtidos demonstraram que os níveis de trans-resveratrol nos vinhos tintos, variaram entre 0,05 e 10,9 μg/mL, enquanto que as concentração de cis-resveratrol variaram entre 0,04 e 8,71 μg/mL. No que diz respeito à actividade antimicrobiana do resveratrol, verificou-se que este composto possui actividade contra todas as bactérias Gram-positivas em estudo. Os resultados demonstraram que o resveratrol tem um efeito bacteriostático que afecta o crescimento da célula bacteriana em todas as estirpes testadas. Quanto ao mecanismo de acção do resveratrol, os resultados obtidos sugerem que o crescimento celular do Bacillus cereus foi inibido, o que por sua vez terá levado à paragem da divisão celular. Na última parte deste trabalho, confirmou-se a actividade antibacteriana do resveratrol em diferentes estirpes de Helicobacter pylori. Para além disso, quer o resveratrol, quer os vinhos tintos analisados demonstraram um efeito inibitório na actividade da urease de Helicobacter pylori. A análise cinética revelou que o resveratrol é um inibidor da urease não competitivo e reversível. O presente trabalho contribuiu por um lado, para o melhor conhecimento do teor de resveratrol nos vinhos portugueses, e por outro demonstrou o potencial do resveratrol como agente antibacteriano, podendo no futuro ter potenciais aplicações tanto na conservação dos alimentos como na terapia clínica.

In this work, an analytical system based on the coupling of gas diffusion separation and sequential injection analysis for urea determination in milk is presented. A versatile manifold that could simultaneously be used for either spectrophotometric or conductometric detection was constructed. The sample and urease solution are sequentially aspirated into the holding coil and sent to a thermoreactor, where urea is enzymatically hydrolyzed by urease and converted into ammonium. This stream merges an alkaline solution at a confluence point where ammonia is formed. Ammonia diffuses through a hydrophobic membrane and modifies the bromothymol blue indicator color, when spectrophotometric detection is used, or changes the conductance of a boric acid solution acceptor stream, when conductometric detection is used.This methodology was applied to the determination of urea in 18 milk samples and the results were statistically comparable with those furnished by the enzymatic recommended procedure. The detection limits were 2.6 10-4 and 2.8 10-5 mol L-1 for conductometric and spectrophotometric detection, respectively. Repeatability (relative standard deviation, RSD) was better than 3.7% and 2.6% for conductometric and spectrophotometric detection, respectively.

A presente monografia foi elaborada com o intuito de rever os conhecimentos sobre a bactéria Helicobacter pylori de uma forma geral, realçando as principais estratégias que têm sido aplicadas no desenvolvimento de uma vacina capaz de a erradicar. O adenocarcinoma gástrico é a terceira principal causa de morte provocado por cancro a nível mundial, com maior incidência nos países em vias de desenvolvimento. A maioria destes cancros estão associados à infeção por H. pylori. Este microrganismo origina uma resposta imune muito intensa por parte do hospedeiro, recorrendo ao seu mecanismo fisiopatológico, desencadeando uma série de patologias gástricas, sendo a mais grave o cancro. O tratamento recomendado atualmente compreende o uso de terapêutica combinada de vários antibióticos com inibidores da bomba de protões. Todavia, uma vez que inúmeros doentes submetidos à terapêutica, não demonstram sucesso no combate à doença, este é considerado um tratamento de difícil execução. Assim, torna-se de extrema importância o desenvolvimento de uma vacina capaz de erradicar esta bactéria, constituindo assim uma ferramenta poderosa na prevenção do cancro gástrico. Com base nesta necessidade, várias iniciativas de desenvolvimento de vacinas vão surgindo, focando-se na descoberta de antigénios e adjuvantes capazes de induzir uma resposta imunitária mais potente, bem como da via de administração mais adequada. Estes estudos mostram que a vacina pode ser profilática, e usada como terapêutica após infeção. Apesar dos inúmeros ensaios clínicos que têm sido desenvolvidos, não existe no mercado nenhuma vacina aprovada. Contudo, uma vacina promissora chegou à fase III dos ensaios clínicos. No entanto, foi descontinuada posteriormente, tornando-se assim a abordagem mais próxima de chegar ao mercado. Apesar de ser uma patologia de alcance global, o desenvolvimento de uma vacina contra H. pylori tem sido efetuado até agora por pequenos laboratórios, mostrando a necessidade de um grande investimento por parte das principais empresas farmacêuticas, com o objetivo de possibilitar a realização de ensaios clínicos mais satisfatórios e conclusivos.