Publication

Comparação de métodos de extração de DNA para a detecção de resíduos de avelã em chocolate como potencial alergéneo

Bibliographic Details
Summary:	As reacções alérgicas causadas pela ingestão de alimentos constituem um problema emergente na gestão da segurança alimentar. De modo a salvaguardar a saúde dos consumidores, os ingredientes que possam causar reacções alérgicas devem ser devidamente rotulados e a contaminação cruzada deve ser evitada. Entre as diversas reacções provocadas pelos alimentos que contêm produtos de casca rija (chocolate, bolachas e bolos), as provocadas pelos alimentos que contêm avelã são consideradas das mais perigosas devido à sua frequência e gravidade [!]. Recentemente, a detecção de resíduos de alergénios recorrendo a técnicas baseadas no DNA, em particular, na reacção em cadeia da polimerase (PCR) têm-se mostrado alternativas promissoras aos métodos imunológicos correntes. Contudo, matrizes complexas corno o chocolate, contêm polissacarídeos e polifenóis que inibem a PCR. Actualmente existem diversos kits comerciais que permitem a extracção de DNA, mas apenas um número Limitado permite a obtenção de DNA em quantidade e pureza adequadas para PCR. Pretendeu-se com este trabalho comparar diversos métodos de extracção de DNA (CTAB, Wizard, Nucleospin e Wizard Magnetic) com e sem a adição de polivinilpirrolidona (PVP) e/ou RNAse. Para tal, prepararam-se misturas de referência contendo quantidades conhecidas de avelã em chocolate (0.01-10%) e procedeu-se à extracção. O rendimento e pureza dos extractos foram avaliados por espectrofotornetria. Para a detecção de avelã foram usados primers específicos para o gene hspl para a obtenção de fragmentos de 100 bp [2]. Os resultados mostraram que os métodos Wizard com RNAse e CTAB, ambos com a adição de PVP 1%, permitiram níveis de amplificação semelhantes até extractos com 0,05% de avelã, com rendimentos mais elevados com o método Wizard (-100 ng/μL). Os métodos Nucleospin Food kit com RNAse e Wizard Magnetic apresentaram rendimentos semelhantes ao método Wizard, tendo também permitido a detecção de 0,05% de avelã, no entanto evidenciaram pouca reprodutibilidade na amplificação.
Main Authors:	Melo, Vítor S.
Other Authors:	Santos, Cristina G.; Costa, Joana; Mafra, Isabel; Amaral, Joana S.; Estevinho, Leticia M.; Oliveira, Beatriz
Year:	2011
Country:	Portugal
Document type:	conference output
Access type:	open access
Associated institution:	Instituto Politécnico de Bragança
Language:	Portuguese
Origin:	Biblioteca Digital do IPB

Description
Summary:	As reacções alérgicas causadas pela ingestão de alimentos constituem um problema emergente na gestão da segurança alimentar. De modo a salvaguardar a saúde dos consumidores, os ingredientes que possam causar reacções alérgicas devem ser devidamente rotulados e a contaminação cruzada deve ser evitada. Entre as diversas reacções provocadas pelos alimentos que contêm produtos de casca rija (chocolate, bolachas e bolos), as provocadas pelos alimentos que contêm avelã são consideradas das mais perigosas devido à sua frequência e gravidade [!]. Recentemente, a detecção de resíduos de alergénios recorrendo a técnicas baseadas no DNA, em particular, na reacção em cadeia da polimerase (PCR) têm-se mostrado alternativas promissoras aos métodos imunológicos correntes. Contudo, matrizes complexas corno o chocolate, contêm polissacarídeos e polifenóis que inibem a PCR. Actualmente existem diversos kits comerciais que permitem a extracção de DNA, mas apenas um número Limitado permite a obtenção de DNA em quantidade e pureza adequadas para PCR. Pretendeu-se com este trabalho comparar diversos métodos de extracção de DNA (CTAB, Wizard, Nucleospin e Wizard Magnetic) com e sem a adição de polivinilpirrolidona (PVP) e/ou RNAse. Para tal, prepararam-se misturas de referência contendo quantidades conhecidas de avelã em chocolate (0.01-10%) e procedeu-se à extracção. O rendimento e pureza dos extractos foram avaliados por espectrofotornetria. Para a detecção de avelã foram usados primers específicos para o gene hspl para a obtenção de fragmentos de 100 bp [2]. Os resultados mostraram que os métodos Wizard com RNAse e CTAB, ambos com a adição de PVP 1%, permitiram níveis de amplificação semelhantes até extractos com 0,05% de avelã, com rendimentos mais elevados com o método Wizard (-100 ng/μL). Os métodos Nucleospin Food kit com RNAse e Wizard Magnetic apresentaram rendimentos semelhantes ao método Wizard, tendo também permitido a detecção de 0,05% de avelã, no entanto evidenciaram pouca reprodutibilidade na amplificação.