Publicação
Validação de método analítico para deteção de 8 cefalosporinas
| Resumo: | O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar um método analítico para detetar oito cefalosporinas produzidas na unidade Hikma II — Cefuroxime, Ceftriaxone, Ceftizoxime, Cefoxitin, Cefotaxime, Cefazolin, Cefepime e Ceftazidime — no contexto das atividades de containment do Controlo de Qualidade. O método anteriormente utilizado por HPLC não permitia a deteção de Cefepime e Ce-ftazidime, o que justificou a necessidade de implementação de um procedimento que que incluísse todos os compostos monitorizados na instalação. Assim, avaliou-se a transferência do método usado em HPLC para UPLC, procurando melhorar o tempo de análise e a capacidade de deteção. A etapa de desenvolvimento incluiu o estudo de várias colunas cromatográficas, com-posições de fase móvel e condições operatórias, com o objetivo de alcançar separação completa das oito cefalosporinas, resolução mínima de 1 e relação sinal-ruído acima de 10. Após testes comparativos, verificou-se que a coluna ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 (1,7 μm, 2,1×50 mm), associada à fase móvel composta por tampão fosfato de pH 4,0, metanol e acetonitrilo na proporção 88:5:7, apresentou o desempenho mais adequado, permitindo a eluição clara dos compostos e tempos de corrida compatíveis com a rotina laboratorial. Foram também comparadas diferentes zaragatoas utilizadas no processo de amostra-gem ao que os ensaios evidenciaram que a zaragatoa Texwipe TX761K apresentava o comportamento mais adequado à fase móvel e às condições instrumentais estudadas, sendo por isso selecionada para os ensaios subsequentes. Definidas as condições operatórias, procedeu-se à validação do método segundo as diretrizes ICH Q2 e o procedimento interno da Hikma Farmacêutica Portugal. Os parâ-metros avaliados foram: adequabilidade do sistema, precisão, linearidade, limites de deteção e quantificação, exatidão em swab challenge e surface test, gama, estabilidade das soluções e especificidade perante placebo e amostras sujeitas a degradação tér-mica e luminosa. Os resultados mostraram que o método cumpre os requisitos estabelecidos para cada um dos parâmetros, cumprindo assim com o objetivo. |
|---|---|
| Autores principais: | Marquês, Daniela Miranda Silva |
| Assunto: | Cefalosporinas Containment HPLC UPLC Validação Cephalosporins Validation |
| Ano: | 2025 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Instituto Politécnico de Setúbal |
| Idioma: | português |
| Origem: | Instituto Politécnico de Setúbal |
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Após testes comparativos, verificou-se que a coluna ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 (1,7 μm, 2,1×50 mm), associada à fase móvel composta por tampão fosfato de pH 4,0, metanol e acetonitrilo na proporção 88:5:7, apresentou o desempenho mais adequado, permitindo a eluição clara dos compostos e tempos de corrida compatíveis com a rotina laboratorial. Foram também comparadas diferentes zaragatoas utilizadas no processo de amostra-gem ao que os ensaios evidenciaram que a zaragatoa Texwipe TX761K apresentava o comportamento mais adequado à fase móvel e às condições instrumentais estudadas, sendo por isso selecionada para os ensaios subsequentes. Definidas as condições operatórias, procedeu-se à validação do método segundo as diretrizes ICH Q2 e o procedimento interno da Hikma Farmacêutica Portugal. 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Therefore, the transfer of the existing HPLC method to UPLC was evaluated, with the aim of improving analysis time and detection capability. The development stage included the assessment of various chromatographic columns, mobile phase compositions and operational conditions, with the objective of achieving complete separation of the eight cephalosporins, a minimum resolution of 1, and a signal-to-noise ratio above 10. Comparative testing showed that the ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 column (1,7 μm, 2,1×50 mm), combined with a mobile phase consisting of phosphate buffer at pH 4,0, methanol and acetonitrile in a ratio of 88:5:7, provided the most suitable performance, allowing clear elution of the compounds and run times com-patible with routine laboratory operation. Different swabs used in the sampling process were also compared. The results showed that the Texwipe TX761K swab revealed the most appropriate behavior under the se-lected mobile phase and instrumental conditions and was therefore chosen for subse-quent testing. Once the operational conditions were established, validation of the method was carried out in accordance with ICH Q2 guidelines and the internal procedure of Hikma Pharma-ceutica Portugal. The parameters assessed included system suitability, precision, linear-ity, limits of detection and quantification, accuracy in swab challenge and surface test, range, solution stability and specificity against placebo and samples subjected to thermal and photolytic degradation. 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