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Production and purification of interferon alpha-2b from Escherichia coli cultures using alternative platforms

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Resumo:A indústria biofarmacêutica tem vindo a desenvolver diferentes tipos de biofármacos para o tratamento de diversas doenças. A maioria das proteínas terapêuticas são produzidas através da tecnologia do DNA recombinante, e purificadas utilizando técnicas convencionais, tais como a precipitação com sais, eletroforese e cromatografia. O interferão alfa-2b (IFNα-2b) é uma proteína terapêutica de ação imunomoduladora com atividade antiviral e antiproliferativa, que é geralmente obtida a partir de culturas de Escherichia coli, e utilizada no tratamento de doenças humanas, tais como a hepatite C, melanomas, alguns linfomas e leucemias, entre outras. Embora a fase de produção recombinante do IFNα-2b já tenha sido amplamente estudada e otimizada, a sua recuperação e purificação assumem-se como os passos economicamente limitantes do processo global de produção. Neste estudo, o IFNα-2b foi produzido na forma de corpos de inclusão utilizando culturas de BL21, no meio SOB, após 3 h de indução. A recuperação desta fração englobou vários passos, tendo sido alcançado um protocolo final que inclui: 1) Lavagem com Triton-X a 1%; 2) Lavagem com ureia a 4 M; e 3) Solubilização em meio alcalino, com ureia a 8 M. Alterando as condições de produção conseguiu-se também produzir e recuperar parte da proteína alvo na forma solúvel, embora com menor rendimento. O IFNα-2b previamente solubilizado foi purificado através de cromatografia aniónica, tendo sido obtido na sua forma biologicamente ativa com uma pureza superior a 95%. Como técnica alternativa de purificação utilizaram-se sistemas aquosos bifásicos constituídos por vários líquidos iónicos e tampão fosfato. Apesar de os resultados serem menos promissores, este estudo permitiu estudar plataformas alternativas para a recuperação e purificação do IFNα-2b através da aplicação de sistemas aquosos bifásicos.
Autores principais:Antunes, Joana Raquel Amaral
Assunto:Biotecnologia Proteínas recombinantes - Purificação Biofármacos Cromatografia líquida Electroforese de proteínas Hepatite - Tratamento
Ano:2017
País:Portugal
Tipo de documento:dissertação de mestrado
Tipo de acesso:acesso aberto
Instituição associada:Universidade de Aveiro
Idioma:inglês
Origem:RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro

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