Publicação

Novel hapten synthesis for antibody generation and development of immunoassays for analysis of Se in Se-rich products

Detalhes bibliográficos
Resumo:	O selénio (Se) é um elemento vestigial essencial com vários benefícios para a saúde. O défice de Se relaciona-se com o risco de doenças cardíacas, imunológicas, e neurológicas, tal como o hipotiroidismo, levando à intensa comercialização de produtos ricos em Se. Porém, a quantificação de Se de forma precisa e exata é extremamente desafiadora e recorre a abordagens demoradas, complexas, custosas e ineficientes. Portanto, é urgente uma nova estratégia de deteção do Se rápida, sensível, específica, precisa e de alto rendimento. Este trabalho apresenta um novo e completo processo de deteção de Se. Dois haptenos de Se foram preparados para o acoplamento de bioconjugados correspondentes, denominados de antígenio 1 e 2, seguindo-se a estimulação de clones por ambos os antigénios. Apenas um clone (5A5 2 ) atendeu aos requisitos — o anticorpo monoclonal (mAb) mostrou menor IC50 e ausência de reatividade cruzada (CR) com o ligante. Um ensaio imunoenzimático competitivo indireto (ic-ELISA) (faixa de deteção de 17-207 pmol mL -1 e um limite de deteção (LOD) de 3.9 pmol mL -1 ) foi desenvolvido e não foram encontradas evidências de CR com iões e ligantes representativos. As recuperações gerais para quatro espécies de Se: selenito (SeO3 2-), selenato (SeO4 2-), selenocisteína (SeCys) e selenometionina (SeMet), foram conseguidas entre 80 % e 108 %, com seus respetivos coeficientes de variação (CVs) entre 2.7 % e 11 %. A correlação e a inclinação entre o ic-ELISA e a espectroscopia de absorção atómica (AAS) foram de 0.991 e 0.866, respetivamente (amostras=10). Além disso, criou-se um ensaio imunoenzimático de sandwich mediado por um agente bifuncional (bts-ELISA), evidenciando elevada sensibilidade (119.2 fmol mL -1 — 32.7 vezes mais do que o ic-ELISA). As recuperações gerais das várias formas de Se foram entre 75.4 % e 104.1%, com seus CVs variando de 3.1 % a 19.0. A inclinação e o coeficiente de correlação entre o bts-ELISA e AAS foram 0.808 e 0.951, respetivamente (amostras=8). Finalmente, reportou-se o desenvolvimento de um imunoensaio de fluxo lateral (LFIA) para a semi-quantificação de Se em suplementos contendo este elemento (LOD de 0.24 nmol mL -1 ; valor de corte visual de 10 nmol mL -1 ). Pela primeira vez, desenvolveu-se um imunoensaio simples, rápido, de elevada sensibilidade e boa repetibilidade para detetar Se, com grande importância analítica prática em produtos ricos em Se.
Autores principais:	Yang, Fanfan
Assunto:	Selénio Imunoensaio de competição enzimática indireta (ic-ELISA) ELISA sandwich mediado por traçador bifuncional (bts-ELISA) Imunoensaio de fluxo lateral (LFIA) Selenium Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) Bifunctional tracer mediated sandwich ELISA (bts-ELISA) Lateral flow immunoassay (LFIA)
Ano:	2023
País:	Portugal
Tipo de documento:	tese de doutoramento
Tipo de acesso:	acesso embargado
Instituição associada:	Universidade do Minho
Idioma:	inglês
Origem:	RepositóriUM - Universidade do Minho

Descrição
Resumo:	O selénio (Se) é um elemento vestigial essencial com vários benefícios para a saúde. O défice de Se relaciona-se com o risco de doenças cardíacas, imunológicas, e neurológicas, tal como o hipotiroidismo, levando à intensa comercialização de produtos ricos em Se. Porém, a quantificação de Se de forma precisa e exata é extremamente desafiadora e recorre a abordagens demoradas, complexas, custosas e ineficientes. Portanto, é urgente uma nova estratégia de deteção do Se rápida, sensível, específica, precisa e de alto rendimento. Este trabalho apresenta um novo e completo processo de deteção de Se. Dois haptenos de Se foram preparados para o acoplamento de bioconjugados correspondentes, denominados de antígenio 1 e 2, seguindo-se a estimulação de clones por ambos os antigénios. Apenas um clone (5A5 2 ) atendeu aos requisitos — o anticorpo monoclonal (mAb) mostrou menor IC50 e ausência de reatividade cruzada (CR) com o ligante. Um ensaio imunoenzimático competitivo indireto (ic-ELISA) (faixa de deteção de 17-207 pmol mL -1 e um limite de deteção (LOD) de 3.9 pmol mL -1 ) foi desenvolvido e não foram encontradas evidências de CR com iões e ligantes representativos. As recuperações gerais para quatro espécies de Se: selenito (SeO3 2-), selenato (SeO4 2-), selenocisteína (SeCys) e selenometionina (SeMet), foram conseguidas entre 80 % e 108 %, com seus respetivos coeficientes de variação (CVs) entre 2.7 % e 11 %. A correlação e a inclinação entre o ic-ELISA e a espectroscopia de absorção atómica (AAS) foram de 0.991 e 0.866, respetivamente (amostras=10). Além disso, criou-se um ensaio imunoenzimático de sandwich mediado por um agente bifuncional (bts-ELISA), evidenciando elevada sensibilidade (119.2 fmol mL -1 — 32.7 vezes mais do que o ic-ELISA). As recuperações gerais das várias formas de Se foram entre 75.4 % e 104.1%, com seus CVs variando de 3.1 % a 19.0. A inclinação e o coeficiente de correlação entre o bts-ELISA e AAS foram 0.808 e 0.951, respetivamente (amostras=8). Finalmente, reportou-se o desenvolvimento de um imunoensaio de fluxo lateral (LFIA) para a semi-quantificação de Se em suplementos contendo este elemento (LOD de 0.24 nmol mL -1 ; valor de corte visual de 10 nmol mL -1 ). Pela primeira vez, desenvolveu-se um imunoensaio simples, rápido, de elevada sensibilidade e boa repetibilidade para detetar Se, com grande importância analítica prática em produtos ricos em Se.