Publicação

Canine Leishmaniasis: Explore modulation of T lymphocytes activity by autologous dendritic cells

Detalhes bibliográficos
Resumo:	A leishmaniose canina é uma doença zoonótica endémica em várias regiões, causada por Leishmania infantum. O cão, como reservatório principal, tem um papel central na transmissão do parasita. As células dendríticas (CDs) são fundamentais na apresentação de antigénios, estabelecendo a ponte entre a imunidade inata e adaptativa. Durante a resposta imune adaptativa, as células T CD4+ e CD8+ imaturas são estimuladas por CDs, diferenciando-se e proliferando em células T efetoras. O estabelecimento da infeção e o desenvolvimento da doença dependem de vários fatores intrínsecos ao parasita e hospedeiro. Assim, a interação entre hospedeiro e parasita, a imunidade inata e adaptativa e os mecanismos de defesa do parasita desempenham um papel crítico no desfecho da doença. O presente estudo teve como objetivo examinar a capacidade de CDs caninas, diferenciadas in vitro e estimuladas por L. infantum, de direcionar a atividade de linfócitos T autólogos. CDs derivadas de monócitos (moCDs) geradas a partir de células mononucleares de sangue periférico foram expostas a promastigotas de L. infantum, estimuladas com antigénios solúveis do parasita (Ag) e por vesículas extracelulares (VEs) libertadas por L. infantum. Co-culturas de moCDs estimuladas e linfócitos autólogos foram estabelecidas. As vias utilizadas por L. infantum para a sinalização das CDs foram analisadas através da expressão génica de recetores toll-like e citocinas. A apresentação antigénica foi indiretamente avaliada através da expressão de moléculas de classe I (MHCI) e classe II (MHCII) do complexo maior de histocompatibilidade. A diferenciação de subpopulações de células T [células T CD4+ , T CD8+ , T reguladoras (Treg) e T de memória] foi investigada por imunofenotipagem e a actividade imunitária e citotóxica analisada, respetivamente, pela expressão génica de citocinas e produção de granzima B e perforina. Durante a infeção por L. infantum, os resultados obtidos indicam que as moCDs foram sinalizadas através de TLR2, TLR4 e TLR9, gerando citocinas pró inflamatórias (TNF-α e IL-12p40) e apresentando antigénios aos linfócitos T através do MHCI e MHCII. Promoveu a expansão de células T CD4+ e CD8+ e a resposta imunitária incluiu a expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-12p40) e anti inflamatórias (IL-4). Nos sobrenadantes das co-culturas foi também detetada granzima B. Foi igualmente observada resposta imunossupressora mediada por células Treg CD4+ e CD8+ e geração de IL-10. Simultaneamente, foi verificado a expansão de células T de memória efetora e central, sugerindo que a ativação de linfócitos T por moCDs estimuladas com L. infantum promove o aumento das células T de memória. Também foi possível perceber que as VEs libertadas pelo parasita têm um enorme potencial imunomodulador, promovendo o desenvolvimento de inflamação, mas simultaneamente uma resposta anti-inflamatória. Em conjunto, os resultados do estudo sugerem que as moCDs caninas são sinalizadas por L. infantum através de sensores intramembranares de superfície e intracelulares, ficando ativadas e podendo modular atividade linfocitária através de apresentação antigénica, induzindo a expansão e ativação das células T helper e T citotóxicas. A ativação dos linfócitos T e a resposta inflamatória gerada parece induzir a regulação da resposta celular e o estabelecimento de memória celular. Abordagens imunoterapêuticas baseadas em CDs direcionadas por estímulos antigénicos precisos podem conduzir ao desenvolvimento de estratégias inovadoras aplicadas ao controlo da leishmaniose.
Autores principais:	MEUNIER, Mafalda Carvalho Planas
Assunto:	Microbiologia médica Biologia molecular Saúde pública Leishmaniose canina Imunidade inata Células dendríticas Imunidade adaptativa Linfócitos T
Ano:	2023
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso embargado
Instituição associada:	Universidade Nova de Lisboa
Idioma:	inglês
Origem:	Repositório Institucional da UNL

Descrição
Resumo:	A leishmaniose canina é uma doença zoonótica endémica em várias regiões, causada por Leishmania infantum. O cão, como reservatório principal, tem um papel central na transmissão do parasita. As células dendríticas (CDs) são fundamentais na apresentação de antigénios, estabelecendo a ponte entre a imunidade inata e adaptativa. Durante a resposta imune adaptativa, as células T CD4+ e CD8+ imaturas são estimuladas por CDs, diferenciando-se e proliferando em células T efetoras. O estabelecimento da infeção e o desenvolvimento da doença dependem de vários fatores intrínsecos ao parasita e hospedeiro. Assim, a interação entre hospedeiro e parasita, a imunidade inata e adaptativa e os mecanismos de defesa do parasita desempenham um papel crítico no desfecho da doença. O presente estudo teve como objetivo examinar a capacidade de CDs caninas, diferenciadas in vitro e estimuladas por L. infantum, de direcionar a atividade de linfócitos T autólogos. CDs derivadas de monócitos (moCDs) geradas a partir de células mononucleares de sangue periférico foram expostas a promastigotas de L. infantum, estimuladas com antigénios solúveis do parasita (Ag) e por vesículas extracelulares (VEs) libertadas por L. infantum. Co-culturas de moCDs estimuladas e linfócitos autólogos foram estabelecidas. As vias utilizadas por L. infantum para a sinalização das CDs foram analisadas através da expressão génica de recetores toll-like e citocinas. A apresentação antigénica foi indiretamente avaliada através da expressão de moléculas de classe I (MHCI) e classe II (MHCII) do complexo maior de histocompatibilidade. A diferenciação de subpopulações de células T [células T CD4+ , T CD8+ , T reguladoras (Treg) e T de memória] foi investigada por imunofenotipagem e a actividade imunitária e citotóxica analisada, respetivamente, pela expressão génica de citocinas e produção de granzima B e perforina. Durante a infeção por L. infantum, os resultados obtidos indicam que as moCDs foram sinalizadas através de TLR2, TLR4 e TLR9, gerando citocinas pró inflamatórias (TNF-α e IL-12p40) e apresentando antigénios aos linfócitos T através do MHCI e MHCII. Promoveu a expansão de células T CD4+ e CD8+ e a resposta imunitária incluiu a expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-12p40) e anti inflamatórias (IL-4). Nos sobrenadantes das co-culturas foi também detetada granzima B. Foi igualmente observada resposta imunossupressora mediada por células Treg CD4+ e CD8+ e geração de IL-10. Simultaneamente, foi verificado a expansão de células T de memória efetora e central, sugerindo que a ativação de linfócitos T por moCDs estimuladas com L. infantum promove o aumento das células T de memória. Também foi possível perceber que as VEs libertadas pelo parasita têm um enorme potencial imunomodulador, promovendo o desenvolvimento de inflamação, mas simultaneamente uma resposta anti-inflamatória. Em conjunto, os resultados do estudo sugerem que as moCDs caninas são sinalizadas por L. infantum através de sensores intramembranares de superfície e intracelulares, ficando ativadas e podendo modular atividade linfocitária através de apresentação antigénica, induzindo a expansão e ativação das células T helper e T citotóxicas. A ativação dos linfócitos T e a resposta inflamatória gerada parece induzir a regulação da resposta celular e o estabelecimento de memória celular. Abordagens imunoterapêuticas baseadas em CDs direcionadas por estímulos antigénicos precisos podem conduzir ao desenvolvimento de estratégias inovadoras aplicadas ao controlo da leishmaniose.