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Isolamento de genes de resistência a Phytophthora cinnamoni e definição de um protocolo de transformação genética em Castanea sativa

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Resumo:Castanea sativa pertence à família Fagaceae, tem um importante papel na ecologia, alimentação e economia. C. sativa sofre de uma doença severa, denominada por doença da tinta, causada maioritariamente pelo agente patogénico Phytophthora cinnamomi. A transformação genética surge como uma ferramenta poderosa para o melhoramento de plantas lenhosas como as espécies de castanheiro. No entanto, para obter uma transformação efectiva é necessário estabelecer um bom protocolo de regeneração. Existe também necessidade de conhecimento dos genes envolvidos na tolerância/sensibilidade. De modo a obter um sistema de regeneração eficiente em C. sativa, testaram-se três sistemas diferentes: embriogénese somática, indução de nódulos organogénicos e indução de regeneração directa de rebentos. A indução de regeneração directa teve um resultado positivo, levando à obtenção de regeneração de rebentos em cerca de 30% e 10% dos hipocótilos e dos epicótilos, respectivamente. Seguiu-se a construção do vector de transformação com um gene exógeno de óxido de aleno ciclase, relacionado com a resistência de C. sativa a P. cinnamomi, sob o controlo do promotor de castanheiro, que direcciona a expressão para as zonas de ataque de P. cinnamomi. Foi desenvolvida a transformação genética de explantes de C. sativa com o vector pCambia 1302 portador do gene mgfp5. Não se obtiveram explantes transformados nestes ensaios, mas confirmou-se a adequação de hipocótilos como explante inicial para indução de regeneração. Contribuindo para o conhecimento da resposta de defesa de Castanea a fungos patogénicos, isolaram-se fragmentos de cDNA de Castanea, genes putativos de tolerância a P. cinnamomi: a ORF de uma β- 1,3- glucanase e fragmentos das ORFs de duas isoformas de óxido de aleno ciclase. Assim, este trabalho teve contribuições na obtenção de um sistema de regeneração, na obtenção de um vector de transformação promissor na transmissão de defesa melhorada de Castanea a fungos patogénicos e no isolamento de genes putativos de tolerância.
Autores principais:Santos, Carmen Sofia Pedro dos, 1987-
Assunto:Biologia molecular Biotecnologia Biologia celular Teses de mestrado - 2010
Ano:2010
País:Portugal
Tipo de documento:dissertação de mestrado
Tipo de acesso:acesso aberto
Instituição associada:Universidade de Lisboa
Idioma:português
Origem:Repositório da Universidade de Lisboa

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