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Manipulação do efeito de Warburg em células de mamífero em cultura

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Resumo:A maioria das linhas celulares de mamífero usadas na produção de biofármacos complexos apresenta um elevado consumo de glucose e acumulação de quantidades significativas de lactato – fenótipo lactogénico associado ao efeito de Warburg – reduzindo a produtividade e qualidade do biofármaco. Este trabalho teve como objectivo a manipulação deste fenótipo, procurando reduzir a acumulação de lactato e aumentar a eficiência do metabolismo energético, com consequente aumento da produtividade e qualidade de partículas virais e anticorpos. As linhas celulares 293 FLEX GFP (produtora de retrovírus), MDCK E1 (produtora de adenovírus) e RPE A6 (produtora de anticorpos monoclonais) foram silenciadas para o factor 1 indutível por hipoxia (HIF1) e cinases 1 e 3 da piruvato desidrogenase (PDK1/3), os principais efectores deste fenótipo. Nas células RPE A6 o silenciamento de HIF1 originou células com baixa capacidade proliferativa sugerindo a reversão da imortalização e entrada em senescência. Sem alterações aparentes no crescimento celular, nas células 293 FLEX GFP observou-se uma diminuição das taxas de consumo de glucose e de produção de lactato aliada a aumentos notáveis na produtividade celular (até 18,2x em partículas totais e até 21,6x em partículas infecciosas) e sua qualidade; o silenciamento adicional de PDK1/3 potenciou estes efeitos, destacando-se o aumento adicional (2,8x) da qualidade do produto final. Nas células MDCK E1 não se obtiveram reduções no consumo de glucose e produção de lactato e os aumentos na produção viral e sua qualidade foram moderados. Adicionalmente, observou-se nas células silenciadas aumento de poder redutor em 293 FLEX GFP e dos níveis de ATP em MDCK E1, suportando a redução do fenótipo lactogénico e aumento de eficiência do metabolismo energético. Estes resultados evidenciam a manipulação do fenótipo lactogénico associado ao efeito de Warburg como potencial ferramenta de engenharia metabólica visando o aumento da produtividade de biofármacos complexos em cultura de células de mamífero.
Autores principais:Guerreiro, Miguel Ricardo, 1988-
Assunto:Cultura de células Efeito de Warburg Produtividade celular Teses de mestrado - 2011
Ano:2011
País:Portugal
Tipo de documento:dissertação de mestrado
Tipo de acesso:acesso aberto
Instituição associada:Universidade de Lisboa
Idioma:português
Origem:Repositório da Universidade de Lisboa

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