Publicação
Protein-based drugs – stability evaluation by confocal raman imaging
| Resumo: | Metodologias rápidas e eficazes são essenciais para atender às necessidades da indústria farmacêutica. Desta forma, o presente trabalho aborda uma importante necessidade de existir uma metodologia analítica que permita a caracterização da estrutura conformacional de uma proteína. Raman Confocal é uma metodologia poderosa para análise farmacêutica de proteínas no estado sólido que pode ser utilizada para testes de identidade e estabilidade, sendo útil para determinar mudanças na estrutura secundária e terciária de proteínas em diferentes matrizes. A identificação de bandas específicas associadas à estrutura secundária foi realizada utilizando proteínas com elementos α-hélice e folha-β. A espectroscopia Raman tem vantagens potenciais significativas na indústria biofarmacêutica, como a especificidade molecular intrinsecamente alta, flexibilidade de configurações de amostragem e a necessidade de pré-tratamento mínimo (ou nenhum) de amostra, podendo ser explorada para fornecer soluções analíticas úteis e exclusivas. No entanto, os métodos baseados em Raman, quando aplicáveis a proteínas, podem ser limitados pela complexidade química das mesmas. No entanto, com conhecimento suficiente sobre a estrutura das proteínas e um bom projeto experimental, métodos analíticos robustos podem ser desenvolvidos. O presente trabalho tem como objetivo definir uma abordagem sistemática para o desenvolvimento de métodos de espectroscopia Raman Confocal através da metodologia AQbD que poderia ser usada para uma ampla gama de moléculas baseadas em proteínas visando detetar mudanças discretas na estrutura conformacional. Nesta dissertação, é apresentado o trabalho realizado no desenvolvimento de um método de identificação e caracterização da estrutura secundária de proteínas, seguindo uma abordagem AQbD. Os resultados demostraram que a metodologia AQbD aplicada foi bem-sucedida. Através desta metodologia foi possível criar condições experimentais robustas que permitiram identificar a estrutura secundária nas proteínas selecionadas para o estudo. No entanto, para algumas das proteínas selecionadas, os resultados não ficaram dentro dos critérios de aceitação estabelecidos no estudo, a fim de identificar as bandas de interesse. Por fim, também foi possível realizar um estudo de degradação forçada termicamente em que foi possível demonstrar ligeiras alterações na estrutura conformacional da proteína selecionada. |
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| Autores principais: | Silva, João Pedro Vaz da Costa |
| Assunto: | Biologic product Quality characterization Confocal raman spectroscopy Stability Teses de mestrado - 2021 |
| Ano: | 2021 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | Metodologias rápidas e eficazes são essenciais para atender às necessidades da indústria farmacêutica. Desta forma, o presente trabalho aborda uma importante necessidade de existir uma metodologia analítica que permita a caracterização da estrutura conformacional de uma proteína. Raman Confocal é uma metodologia poderosa para análise farmacêutica de proteínas no estado sólido que pode ser utilizada para testes de identidade e estabilidade, sendo útil para determinar mudanças na estrutura secundária e terciária de proteínas em diferentes matrizes. A identificação de bandas específicas associadas à estrutura secundária foi realizada utilizando proteínas com elementos α-hélice e folha-β. A espectroscopia Raman tem vantagens potenciais significativas na indústria biofarmacêutica, como a especificidade molecular intrinsecamente alta, flexibilidade de configurações de amostragem e a necessidade de pré-tratamento mínimo (ou nenhum) de amostra, podendo ser explorada para fornecer soluções analíticas úteis e exclusivas. No entanto, os métodos baseados em Raman, quando aplicáveis a proteínas, podem ser limitados pela complexidade química das mesmas. No entanto, com conhecimento suficiente sobre a estrutura das proteínas e um bom projeto experimental, métodos analíticos robustos podem ser desenvolvidos. O presente trabalho tem como objetivo definir uma abordagem sistemática para o desenvolvimento de métodos de espectroscopia Raman Confocal através da metodologia AQbD que poderia ser usada para uma ampla gama de moléculas baseadas em proteínas visando detetar mudanças discretas na estrutura conformacional. Nesta dissertação, é apresentado o trabalho realizado no desenvolvimento de um método de identificação e caracterização da estrutura secundária de proteínas, seguindo uma abordagem AQbD. Os resultados demostraram que a metodologia AQbD aplicada foi bem-sucedida. Através desta metodologia foi possível criar condições experimentais robustas que permitiram identificar a estrutura secundária nas proteínas selecionadas para o estudo. No entanto, para algumas das proteínas selecionadas, os resultados não ficaram dentro dos critérios de aceitação estabelecidos no estudo, a fim de identificar as bandas de interesse. Por fim, também foi possível realizar um estudo de degradação forçada termicamente em que foi possível demonstrar ligeiras alterações na estrutura conformacional da proteína selecionada. |
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