Publicação
Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens
| Resumo: | As bactérias patogénicas são capazes de aderir e invadir células e tecidos do hospedeiro, através da produção de macromoléculas denominadas adesinas. A fotobacteriose é uma septicemia que ameaça a produção de peixes marinhos, causada pela bactéria gram-negativa Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp). Embora tenham sido descritos diversos mecanismos de virulência da Phdp, a sua patogenicidade não está completamente elucidada. Estudos realizados numa estirpe hipervirulenta de Phdp (HV#10) levaram à descoberta de duas proteínas, PadA e PadB, que não estão presentes na estirpe virulenta MT1415. Previsões in silico sugerem que se trata de adesinas triméricas autotransportadas (TAAs). Com base no que se conhece sobre a função de TAAs em diversas bactérias, prevê-se que a PadA e PadB possam desempenhar um papel importante na virulência de Phdp. Com base nesta premissa, foram desenvolvidas ferramentas que permitam estudar a função biológica destas proteínas, assim como testar o seu potencial como componentes de vacinas contra a fotobacteriose. Os genes codificantes da PadA e PadB encontram-se localizados num plasmídeo instável que é rapidamente perdido durante o crescimento in vitro, o que dificulta a obtenção de mutantes da PadA e PadB. Assim sendo, optou-se por uma estratégia alternativa, baseada no uso da estirpe MT1415, que não contém estas proteínas. Utilizando técnicas de biologia molecular, as sequências codificantes da PadA e PadB foram clonadas num vetor mobilizável, e as construções obtidas foram introduzidos na estirpe MT1415 por conjugação, o que permitiu obter clones MT1415 a expressar PadA e PadB. Estes clones foram usados em testes biológicos para avaliar agregação bacteriana e formação de biofilme. Os resultados obtidos, embora preliminares, sugerem que a expressão da PadA e PadB não promove a agregação bacteriana nem a formação de biofilmes. No entanto, a análise microscópica das culturas bacterianas em crescimento estático revelou diferenças na distribuição/associação das células. Estas observações são promissoras e sugerem que com um melhoramento e otimização dos protocolos poderá ser possível detetar diferenças na adesão das bactérias a superfícies. Com o intuito de produzir versões recombinantes da PadA e PadB para posterior uso no desenvolvimento experimental de vacinas anti-Phdp, foram clonadas as sequências codificantes de versões completas e truncadas das proteínas num vetor de expressão em E. coli e foram realizados testes de expressão em pequena escala, para determinar a melhor condição para expressão de cada proteína. De seguida, foi realizada expressão em larga escala e purificação de versões selecionadas de PadA e PadB, o que permitiu obter proteínas puras e em quantidade suficiente para a produção de anticorpos. Em conclusão, este trabalho permitiu gerar ferramentas importantes para o estudo da função biológica das PadA e PadB de Phdp, assim como para explorar o seu potencial biotecnológico. Isto é um passo importante não só para o entendimento dos mecanismos subjacentes às infecções por Phdp, mas também para o desenvolvimento de novas e mais eficientes medidas profiláticas contra a fotobacteriose. Além disso, num contexto mais amplo, o estudo destas proteínas pode contribuir para compreender as funções de outras TAA de bactérias patogénicas para o Homem e outros animais. |
|---|---|
| Autores principais: | Afonso, Gabriela Alves |
| Assunto: | Fotobacteriose TAAs |
| Ano: | 2022 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso restrito |
| Instituição associada: | Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da UTAD |
| _version_ | 1865920858207289344 |
|---|---|
| author | Afonso, Gabriela Alves |
| author_facet | Afonso, Gabriela Alves Afonso, Gabriela Alves |
| author_role | author |
| contributor.other.fl_str_mv | Chaves, Raquel |
| contributor_name_str_mv | Vale, Ana Maria Silva do Chaves, Raquel Repositório Institucional da UTAD |
| country_str | PT |
| creators_json_str | [{\"Person.name\":\"Afonso, Gabriela Alves\"}] |
| datacite.contributors.contributor.contributorName.fl_str_mv | Vale, Ana Maria Silva do Chaves, Raquel Repositório Institucional da UTAD |
| datacite.creators.creator.creatorName.fl_str_mv | Afonso, Gabriela Alves |
| datacite.date.Accepted.fl_str_mv | 2022-09-05T00:00:00Z |
| datacite.date.available.fl_str_mv | 2023-03-29T17:15:02Z |
| datacite.date.embargoed.fl_str_mv | 2023-03-29T17:15:02Z |
| datacite.rights.fl_str_mv | http://purl.org/coar/access_right/c_16ec |
| datacite.subjects.subject.fl_str_mv | Fotobacteriose TAAs |
| datacite.titles.title.fl_str_mv | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| dc.contributor.none.fl_str_mv | Vale, Ana Maria Silva do Chaves, Raquel Repositório Institucional da UTAD |
| dc.creator.none.fl_str_mv | Afonso, Gabriela Alves |
| dc.date.Accepted.fl_str_mv | 2022-09-05T00:00:00Z |
| dc.date.available.fl_str_mv | 2023-03-29T17:15:02Z |
| dc.date.embargoed.fl_str_mv | 2023-03-29T17:15:02Z |
| dc.format.none.fl_str_mv | application/pdf application/pdf application/pdf |
| dc.identifier.none.fl_str_mv | http://hdl.handle.net/10348/11477 |
| dc.language.none.fl_str_mv | eng |
| dc.rights.none.fl_str_mv | http://purl.org/coar/access_right/c_16ec |
| dc.subject.none.fl_str_mv | Fotobacteriose TAAs |
| dc.title.fl_str_mv | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| dc.type.none.fl_str_mv | http://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc |
| description | As bactérias patogénicas são capazes de aderir e invadir células e tecidos do hospedeiro, através da produção de macromoléculas denominadas adesinas. A fotobacteriose é uma septicemia que ameaça a produção de peixes marinhos, causada pela bactéria gram-negativa Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp). Embora tenham sido descritos diversos mecanismos de virulência da Phdp, a sua patogenicidade não está completamente elucidada. Estudos realizados numa estirpe hipervirulenta de Phdp (HV#10) levaram à descoberta de duas proteínas, PadA e PadB, que não estão presentes na estirpe virulenta MT1415. Previsões in silico sugerem que se trata de adesinas triméricas autotransportadas (TAAs). Com base no que se conhece sobre a função de TAAs em diversas bactérias, prevê-se que a PadA e PadB possam desempenhar um papel importante na virulência de Phdp. Com base nesta premissa, foram desenvolvidas ferramentas que permitam estudar a função biológica destas proteínas, assim como testar o seu potencial como componentes de vacinas contra a fotobacteriose. Os genes codificantes da PadA e PadB encontram-se localizados num plasmídeo instável que é rapidamente perdido durante o crescimento in vitro, o que dificulta a obtenção de mutantes da PadA e PadB. Assim sendo, optou-se por uma estratégia alternativa, baseada no uso da estirpe MT1415, que não contém estas proteínas. Utilizando técnicas de biologia molecular, as sequências codificantes da PadA e PadB foram clonadas num vetor mobilizável, e as construções obtidas foram introduzidos na estirpe MT1415 por conjugação, o que permitiu obter clones MT1415 a expressar PadA e PadB. Estes clones foram usados em testes biológicos para avaliar agregação bacteriana e formação de biofilme. Os resultados obtidos, embora preliminares, sugerem que a expressão da PadA e PadB não promove a agregação bacteriana nem a formação de biofilmes. No entanto, a análise microscópica das culturas bacterianas em crescimento estático revelou diferenças na distribuição/associação das células. Estas observações são promissoras e sugerem que com um melhoramento e otimização dos protocolos poderá ser possível detetar diferenças na adesão das bactérias a superfícies. Com o intuito de produzir versões recombinantes da PadA e PadB para posterior uso no desenvolvimento experimental de vacinas anti-Phdp, foram clonadas as sequências codificantes de versões completas e truncadas das proteínas num vetor de expressão em E. coli e foram realizados testes de expressão em pequena escala, para determinar a melhor condição para expressão de cada proteína. De seguida, foi realizada expressão em larga escala e purificação de versões selecionadas de PadA e PadB, o que permitiu obter proteínas puras e em quantidade suficiente para a produção de anticorpos. Em conclusão, este trabalho permitiu gerar ferramentas importantes para o estudo da função biológica das PadA e PadB de Phdp, assim como para explorar o seu potencial biotecnológico. Isto é um passo importante não só para o entendimento dos mecanismos subjacentes às infecções por Phdp, mas também para o desenvolvimento de novas e mais eficientes medidas profiláticas contra a fotobacteriose. Além disso, num contexto mais amplo, o estudo destas proteínas pode contribuir para compreender as funções de outras TAA de bactérias patogénicas para o Homem e outros animais. |
| dirty | 0 |
| eu_rights_str_mv | restrictedAccess |
| format | masterThesis |
| fulltext.url.fl_str_mv | https://repositorio.utad.pt/bitstreams/91487f9b-1b7d-4e58-a02c-b5a5b052431b/download |
| id | utad_24f024b25ad1f16d9a67aabc0ecdfca7 |
| identifier.url.fl_str_mv | http://hdl.handle.net/10348/11477 |
| instacron_str | utad |
| institution | Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro |
| instname_str | Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro |
| language | eng |
| network_acronym_str | utad |
| network_name_str | Repositório da UTAD |
| oai_identifier_str | oai:repositorio.utad.pt:10348/11477 |
| organization_str_mv | urn:organizationAcronym:utad |
| person_str_mv | Afonso, Gabriela Alves Chaves, Raquel Chaves, Raquel https://www.ciencia-id.pt/6E14-0BC7-0A93 6E14-0BC7-0A93 http://orcid.org/0000-0002-5970-7428 0000-0002-5970-7428 |
| publishDate | 2022 |
| reponame_str | Repositório da UTAD |
| repository_id_str | urn:repositoryAcronym:utad |
| service_str_mv | urn:repositoryAcronym:utad |
| spelling | engpt_PTAs bactérias patogénicas são capazes de aderir e invadir células e tecidos do hospedeiro, através da produção de macromoléculas denominadas adesinas. A fotobacteriose é uma septicemia que ameaça a produção de peixes marinhos, causada pela bactéria gram-negativa Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp). Embora tenham sido descritos diversos mecanismos de virulência da Phdp, a sua patogenicidade não está completamente elucidada. Estudos realizados numa estirpe hipervirulenta de Phdp (HV#10) levaram à descoberta de duas proteínas, PadA e PadB, que não estão presentes na estirpe virulenta MT1415. Previsões in silico sugerem que se trata de adesinas triméricas autotransportadas (TAAs). Com base no que se conhece sobre a função de TAAs em diversas bactérias, prevê-se que a PadA e PadB possam desempenhar um papel importante na virulência de Phdp. Com base nesta premissa, foram desenvolvidas ferramentas que permitam estudar a função biológica destas proteínas, assim como testar o seu potencial como componentes de vacinas contra a fotobacteriose. Os genes codificantes da PadA e PadB encontram-se localizados num plasmídeo instável que é rapidamente perdido durante o crescimento in vitro, o que dificulta a obtenção de mutantes da PadA e PadB. Assim sendo, optou-se por uma estratégia alternativa, baseada no uso da estirpe MT1415, que não contém estas proteínas. Utilizando técnicas de biologia molecular, as sequências codificantes da PadA e PadB foram clonadas num vetor mobilizável, e as construções obtidas foram introduzidos na estirpe MT1415 por conjugação, o que permitiu obter clones MT1415 a expressar PadA e PadB. Estes clones foram usados em testes biológicos para avaliar agregação bacteriana e formação de biofilme. Os resultados obtidos, embora preliminares, sugerem que a expressão da PadA e PadB não promove a agregação bacteriana nem a formação de biofilmes. No entanto, a análise microscópica das culturas bacterianas em crescimento estático revelou diferenças na distribuição/associação das células. Estas observações são promissoras e sugerem que com um melhoramento e otimização dos protocolos poderá ser possível detetar diferenças na adesão das bactérias a superfícies. Com o intuito de produzir versões recombinantes da PadA e PadB para posterior uso no desenvolvimento experimental de vacinas anti-Phdp, foram clonadas as sequências codificantes de versões completas e truncadas das proteínas num vetor de expressão em E. coli e foram realizados testes de expressão em pequena escala, para determinar a melhor condição para expressão de cada proteína. De seguida, foi realizada expressão em larga escala e purificação de versões selecionadas de PadA e PadB, o que permitiu obter proteínas puras e em quantidade suficiente para a produção de anticorpos. Em conclusão, este trabalho permitiu gerar ferramentas importantes para o estudo da função biológica das PadA e PadB de Phdp, assim como para explorar o seu potencial biotecnológico. Isto é um passo importante não só para o entendimento dos mecanismos subjacentes às infecções por Phdp, mas também para o desenvolvimento de novas e mais eficientes medidas profiláticas contra a fotobacteriose. Além disso, num contexto mais amplo, o estudo destas proteínas pode contribuir para compreender as funções de outras TAA de bactérias patogénicas para o Homem e outros animais.application/pdfapplication/pdfapplication/pdfpt_PTTrimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigensAfonso, Gabriela AlvesVale, Ana Maria Silva doOtherPersonalChaves, RaquelRaquel Maria Garcia dos SantosChavesUTAD-DGBScopus Author IDhttps://www.scopus.com7003756613Scopus Author IDhttps://www.scopus.com57208926989Ciência IDhttps://www.ciencia-id.pt6E14-0BC7-0A93ORCIDhttp://orcid.org0000-0002-5970-7428Researcher IDhttps://www.researcherid.comK-3044-2013HostingInstitutionOrganizationalRepositório Institucional da UTADe-mailmailto:jborges@utad.ptjborges@utad.pt2023-03-29T17:15:02Z2022-09-052022-09-05T00:00:00ZHandlehttp://hdl.handle.net/10348/11477http://purl.org/coar/access_right/c_16ecrestricted accessFotobacterioseTAAs781337 bytes281152 bytes1946894 bytesliteraturehttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdccmaster thesishttp://purl.org/coar/access_right/c_16ecapplication/pdffulltexthttps://repositorio.utad.pt/bitstreams/91487f9b-1b7d-4e58-a02c-b5a5b052431b/downloadhttp://purl.org/coar/access_right/c_16ecapplication/pdffulltexthttps://repositorio.utad.pt/bitstreams/7276aaf1-c89c-4864-82e2-f8c972a7e10e/downloadhttp://purl.org/coar/access_right/c_16ecapplication/pdffulltexthttps://repositorio.utad.pt/bitstreams/f8dff1fe-66e3-42ae-92ba-d170141bb4e3/download |
| spellingShingle | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens Afonso, Gabriela Alves Fotobacteriose TAAs Afonso, Gabriela Alves Fotobacteriose TAAs |
| status | NEW |
| subject.fl_str_mv | Fotobacteriose TAAs |
| title | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| title_full | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| title_fullStr | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| title_full_unstemmed | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| title_short | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| title_sort | Trimeric autotransporter adhesins (TAAs) from Photobacterium damselae subsp. piscicida: investigation of biological functions and recombinant production to use as antigens |
| topic | Fotobacteriose TAAs |
| topic_facet | Fotobacteriose TAAs |
| url | http://hdl.handle.net/10348/11477 |
| visible | 1 |