Publicação
Quantification of amino acids misincorporation in recombinant proteins
| Resumo: | A síntese de proteínas de acordo com o código genético é essencial para manter proteoma estável e para a homeostase celular. No entanto, os erros podem ocorrer naturalmente durante a síntese da proteína a partir do seu mRNA, variando entre 10-3 a 10-4 erros por codão. Estes erros ocorrem com mais frequncia em proteínas recombinantes sobre-expressas em hospedeiros heterólogos. Quantidades crescentes de proteína não-funcional estão geralmente relacionados à tradução em condições de stress. Neste estudo utilizou-se Saccharomyces cerevisiae como um organismo hospedeiro para expressar o gene lacZ-GST para quantificar o erro de tradução. A levedura foi tratada com diversos agentes de stress tais como o etanol, o crómio (CrO3), e aminoglicósido antibiótico - geneticina (G418). A incorporação de erros foi estudada em proteína solúvel e insolúvel para determiner se os erros de tradução aumentam a agregação de proteína. Usando esta abordagem, verificou-se que o stress aumenta o erro de tradução para níveis de 5.6 × 10-3 a 8 × 10-3, 60 - 80 vezes mais que o nível normal. Esta taxa de erro inesperadamente elevada tem implicações para a utilização terapêutica de proteínas recombinantes. |
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| Autores principais: | Alam, Mohammad Zahangir |
| Assunto: | Biologia molecular Proteínas - Síntese química Proteínas recombinantes Aminoácidos |
| Ano: | 2012 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Aveiro |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro |
| Resumo: | A síntese de proteínas de acordo com o código genético é essencial para manter proteoma estável e para a homeostase celular. No entanto, os erros podem ocorrer naturalmente durante a síntese da proteína a partir do seu mRNA, variando entre 10-3 a 10-4 erros por codão. Estes erros ocorrem com mais frequncia em proteínas recombinantes sobre-expressas em hospedeiros heterólogos. Quantidades crescentes de proteína não-funcional estão geralmente relacionados à tradução em condições de stress. Neste estudo utilizou-se Saccharomyces cerevisiae como um organismo hospedeiro para expressar o gene lacZ-GST para quantificar o erro de tradução. A levedura foi tratada com diversos agentes de stress tais como o etanol, o crómio (CrO3), e aminoglicósido antibiótico - geneticina (G418). A incorporação de erros foi estudada em proteína solúvel e insolúvel para determiner se os erros de tradução aumentam a agregação de proteína. Usando esta abordagem, verificou-se que o stress aumenta o erro de tradução para níveis de 5.6 × 10-3 a 8 × 10-3, 60 - 80 vezes mais que o nível normal. Esta taxa de erro inesperadamente elevada tem implicações para a utilização terapêutica de proteínas recombinantes. |
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