Publicação

Perfil molecular e metabólico de exposição in vitro individual e combinada a nanoplásticos e bisfenol A avaliados por FTIR

Detalhes bibliográficos
Resumo:	O uso excessivo de plástico tem gerado preocupações sobre a exposição a nanoplásticos (NPs) e bisfenol A (BPA) e os seus impactos na saúde humana. Evidências científicas mostram que estes poluentes podem acumular-se no intestino e entrar no organismo. A capacidade de induzir genoxicidade do BPA tem sido amplamente estudado, e a sua exposição pode promover processos inflamatórios e formação de micronúcleos. Os efeitos dos NPs nas células e tecidos de mamíferos permanecem pouco claros. A avaliação dos efeitos citogenéticos de agentes genotóxicos é geralmente feita através do ensaio dos micronúcleos por bloqueio de citocinese (CBMN), no entanto, devido à laboriosidade e complexidade da técnica, o presente trabalho teve como objetivo avaliar um novo método para detetar os efeitos in vitro dos NPs e BPA, e que seja sensível, mas mais simples e rápido em relação ao CBMN. No presente trabalho foram avaliadas a exposição individual e combinada de BPA e nanopartículas de poliestireno (PS-NPs), na linha celular gástrica GP202. Foram analisados por espectroscopia de infravermelho transformada de Fourier (FTIR) os meios de cultura designado por 0h após exposição, os meios de cultura 24h após finda a exposição e as células 24h após finda a exposição. Por CBMN, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas da exposição a NPs e BPA em relação ao controlo, observando-se uma tendência de aumento de micronúcleos (MN), pontes nucleoplasmáticas (NBPs) e protusões nucleares (NBUDs), na exposição combinada de PS-NPs e BPA. Foi efetuada uma análise univariada de várias bandas espectrais FTIR, após diversos pré-processamentos espetrais, como correção de linha de base, correção de linha de base com normalização, 2ª derivada e 2ª derivada com normalização. Foram observadas várias bandas estatisticamente diferentes, com significância a 1%, 5% e 10%, quer em comparações múltiplas entre as condições de exposição, quer entre comparações entre pares de condições de exposição. Estas alterações foram observadas dos espetros obtidos dos meios de cultura e diretamente das células. O espetro de FTIR representa o perfil molecular do meio de cultura e das células, resultado do estado metabólico das células. Desta forma, a espectroscopia de FTIR apresenta-se como uma técnica bastante sensível, rápida e simples de implementar para detetar alterações metabólicas nas linhas celulares gástricas quando expostas a NPs e BPA, mesmo em condições em que não há alterações genotóxicas, tal como detetado por CBMN.
Autores principais:	Tomás, Daniela Branco
Assunto:	Espectroscopia FTIR Nanoplásticos Bisfenol A Genotoxicidade Ensaio CBMN FTIR spectroscopy Nanoplastics Bisphenol A Genotoxicity CBMN assay IPL/IDI&CA2024/R-DICIP_ISEL IPL/IDICA2021/PLASCOGEN_ESTeSL FCT_DSAIPA/DS/0117/2020 MTCL
Ano:	2024
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Instituto Politécnico de Lisboa
Idioma:	português
Origem:	Repositório Científico do Instituto Politécnico de Lisboa

Descrição
Resumo:	O uso excessivo de plástico tem gerado preocupações sobre a exposição a nanoplásticos (NPs) e bisfenol A (BPA) e os seus impactos na saúde humana. Evidências científicas mostram que estes poluentes podem acumular-se no intestino e entrar no organismo. A capacidade de induzir genoxicidade do BPA tem sido amplamente estudado, e a sua exposição pode promover processos inflamatórios e formação de micronúcleos. Os efeitos dos NPs nas células e tecidos de mamíferos permanecem pouco claros. A avaliação dos efeitos citogenéticos de agentes genotóxicos é geralmente feita através do ensaio dos micronúcleos por bloqueio de citocinese (CBMN), no entanto, devido à laboriosidade e complexidade da técnica, o presente trabalho teve como objetivo avaliar um novo método para detetar os efeitos in vitro dos NPs e BPA, e que seja sensível, mas mais simples e rápido em relação ao CBMN. No presente trabalho foram avaliadas a exposição individual e combinada de BPA e nanopartículas de poliestireno (PS-NPs), na linha celular gástrica GP202. Foram analisados por espectroscopia de infravermelho transformada de Fourier (FTIR) os meios de cultura designado por 0h após exposição, os meios de cultura 24h após finda a exposição e as células 24h após finda a exposição. Por CBMN, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas da exposição a NPs e BPA em relação ao controlo, observando-se uma tendência de aumento de micronúcleos (MN), pontes nucleoplasmáticas (NBPs) e protusões nucleares (NBUDs), na exposição combinada de PS-NPs e BPA. Foi efetuada uma análise univariada de várias bandas espectrais FTIR, após diversos pré-processamentos espetrais, como correção de linha de base, correção de linha de base com normalização, 2ª derivada e 2ª derivada com normalização. Foram observadas várias bandas estatisticamente diferentes, com significância a 1%, 5% e 10%, quer em comparações múltiplas entre as condições de exposição, quer entre comparações entre pares de condições de exposição. Estas alterações foram observadas dos espetros obtidos dos meios de cultura e diretamente das células. O espetro de FTIR representa o perfil molecular do meio de cultura e das células, resultado do estado metabólico das células. Desta forma, a espectroscopia de FTIR apresenta-se como uma técnica bastante sensível, rápida e simples de implementar para detetar alterações metabólicas nas linhas celulares gástricas quando expostas a NPs e BPA, mesmo em condições em que não há alterações genotóxicas, tal como detetado por CBMN.