Publicação
Development and validation of a PNA-FISH method for Vibrio detection
| Resumo: | As doenças relacionadas com o consumo de alimentos contaminados constituem um sério problema global de saúde pública e são responsáveis por um grande número de infeções, hospitalizações e até mesmo mortes. A estratégia mais eficaz para controlar e prevenir este tipo de doenças passa por uma identificação precoce de alimentos contaminados a fim de se evitar a entrada destes produtos na cadeia de consumo. Sabe-se que entre os principais patogénios alimentares estão Escherichia coli O157, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. No entanto, em zonas costeiras, onde o consumo de marisco e peixes é mais frequente, o surgimento de Vibrio spp., género de bactérias aquáticas gram-negativas, como principais causadoras de doenças associadas ao consumo destes alimentos tem vindo a aumentar. De entre as espécies de Vibrio; Vibrio vulnificus, Vibrio choleare e Vibrio parahaemolyticus destacam-se como sendo as mais importantes no que diz respeito à segurança alimentar. Técnicas como a de hibridação fluorescente in situ (FISH) com recurso a sondas de ácido péptido nucleico (PNA), têm vindo a afirmar-se nos últimos anos com diversas aplicações para a deteção de patogénios alimentares. PNA-FISH é uma técnica de deteção simples, rápida e altamente sensível que envolve a hibridação de sondas marcadas com fluorescência, que têm como alvo regiões conservadas do RNA ribossomal bacteriano. A estrutura da molécula de PNA permite que as sondas se liguem rapidamente aos alvos de DNA ou RNA com melhor estabilidade térmica e uma maior afinidade do que outras moléculas. O objetivo deste trabalho passou pela otimização das sondas de PNA de maneira a uniformizar as condições de hibridação para uma abordagem multiplex para deteção de V. vulnificus, V. cholerae e V. parahaemolyticus em alimentos. Posteriormente, o meio Alkaline Saline Peptone Water (ASPW) foi avaliado como forma de enriquecimento para o crescimento simultâneo de V. vulnificus, V. cholerae e V. parahaemolyticus a partir de amostras alimentares, com o objectivo de encontrar um passo de enriquecimento adequado para a técnica de PNA-FISH. Após os ensaios de otimização das sondas de PNA chegou-se à conclusão que as condições ótimas de hibridação para as três bactérias eram semelhantes, por isso, uma verdadeira abordagem multiplex seria possível. Contudo a avaliação do meio de enriquecimento, ASPW, não foi conclusiva. A maior parte dos alimentos apresentava contaminação natural com V. parahaemolyticus; enquanto as espécies de V. cholerae e V. vulnificus demonstraram ser de difícil crescimento na presença da microflora natural da matriz alimentar. |
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| Autores principais: | Guedes, Francisca Marçal Queiroz Pinheiro |
| Assunto: | Vibrio PNA FISH Patogénios Alimentares Foodborne Pathogens |
| Ano: | 2016 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade do Minho |
| Idioma: | português |
| Origem: | RepositóriUM - Universidade do Minho |
| Resumo: | As doenças relacionadas com o consumo de alimentos contaminados constituem um sério problema global de saúde pública e são responsáveis por um grande número de infeções, hospitalizações e até mesmo mortes. A estratégia mais eficaz para controlar e prevenir este tipo de doenças passa por uma identificação precoce de alimentos contaminados a fim de se evitar a entrada destes produtos na cadeia de consumo. Sabe-se que entre os principais patogénios alimentares estão Escherichia coli O157, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. No entanto, em zonas costeiras, onde o consumo de marisco e peixes é mais frequente, o surgimento de Vibrio spp., género de bactérias aquáticas gram-negativas, como principais causadoras de doenças associadas ao consumo destes alimentos tem vindo a aumentar. De entre as espécies de Vibrio; Vibrio vulnificus, Vibrio choleare e Vibrio parahaemolyticus destacam-se como sendo as mais importantes no que diz respeito à segurança alimentar. Técnicas como a de hibridação fluorescente in situ (FISH) com recurso a sondas de ácido péptido nucleico (PNA), têm vindo a afirmar-se nos últimos anos com diversas aplicações para a deteção de patogénios alimentares. PNA-FISH é uma técnica de deteção simples, rápida e altamente sensível que envolve a hibridação de sondas marcadas com fluorescência, que têm como alvo regiões conservadas do RNA ribossomal bacteriano. A estrutura da molécula de PNA permite que as sondas se liguem rapidamente aos alvos de DNA ou RNA com melhor estabilidade térmica e uma maior afinidade do que outras moléculas. O objetivo deste trabalho passou pela otimização das sondas de PNA de maneira a uniformizar as condições de hibridação para uma abordagem multiplex para deteção de V. vulnificus, V. cholerae e V. parahaemolyticus em alimentos. Posteriormente, o meio Alkaline Saline Peptone Water (ASPW) foi avaliado como forma de enriquecimento para o crescimento simultâneo de V. vulnificus, V. cholerae e V. parahaemolyticus a partir de amostras alimentares, com o objectivo de encontrar um passo de enriquecimento adequado para a técnica de PNA-FISH. Após os ensaios de otimização das sondas de PNA chegou-se à conclusão que as condições ótimas de hibridação para as três bactérias eram semelhantes, por isso, uma verdadeira abordagem multiplex seria possível. Contudo a avaliação do meio de enriquecimento, ASPW, não foi conclusiva. A maior parte dos alimentos apresentava contaminação natural com V. parahaemolyticus; enquanto as espécies de V. cholerae e V. vulnificus demonstraram ser de difícil crescimento na presença da microflora natural da matriz alimentar. |
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