Publicação

Desenvolvimento de um meio de cultura selectivo-diferencial para a levedura de contaminação alimentar Zygosaccharomyces Bailii

Detalhes bibliográficos
Resumo:	Zygosaccharomyces bailii é uma levedura frequentemente associada a problemas de contaminação alimentar dada a sua capacidade de sobreviver em ambientes ácidos na presença de ácidos orgânicos fracos normalmente utilizados como conservantes químicos na indústria alimentar. Com vista a desenvolver um meio diferencial para Z. bailii recorreu-se a uma colecção de leveduras isoladas preferencialmente de vinhos contaminados. Assim, as estirpes seleccionadas para este estudo diferiram na sua origem e resistência a preservativos ácidos e pertenceram às espécies de Pichia membranaefaciens, Pichia anomala, Torulaspora delbrueckii, Dekkera anomala, Dekkera bruxellensis, Debaryomyces hansenii, Saccharomycodes ludwigii, Issatchenkia orientalis, Kluyveromyces marxianus, Kloeckera apiculata, Lodderomyces elongisporus, Schizosaccharomyces pombe, Rhodotorula mucilaginosa, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces bayanus, Zygosaccharomyces rouxii, Zygosaccharomyces bisporus, Zygosaccharomyces florentinus e Zygosaccharomyces bailii. O desenho do meio de cultura baseou-se na diferente capacidade de crescimento, que as diferentes espécies de levedura apresentam em meio mineral com substrato simples (ácido carboxílico fraco) ou com substratos misto (açúcar e ácido carboxílico fraco) como únicas fontes de carbono e energia. Quando os ensaios foram conduzidos num meio líquido com substrato simples, a maior parte das estirpes apresentou capacidade de utilizar pelo menos um dos vários ácidos carboxílicos testados. A natureza do ácido e a sua concentração bem como a manipulação do pH do meio, associada à incorporação de um indicador ácido-base, permitiu seleccionar condições em que somente as estirpes de Z. bailii originavam variação de cor do meio (resposta positiva). Contudo, esta resposta só foi observada após 115 a 168 h. Quando se utilizou o meio com substratos misto (glucose 0,1 %, p/v e ácido fórmico 0,3 %, v/v), em todas as estirpes de Z. bailii observou-se resposta positiva após um período de tempo consideravelmente mais reduzido (cerca de 48 h) quando comparado com o meio com substrato simples para a mesma densidade de inóculo e para as mesmas condições de incubação. Utilizando quer microplacas, quer meio sólido, procedeu-se de seguida à avaliação do comportamento deste meio com substratos misto para as outras espécies da colecção. Em ambos os casos somente as espécies de Z. bailii apresentaram resposta positiva durante as primeiras 48 h de incubação. No entanto a estirpe IGC 4194 de Z. rouxii apresentou uma resposta falso-positiva. O aumento da concentração do ácido fórmico no meio com substratos misto a pH 4,5 (glucose 0,1 %, p/v e ácido fórmico 0,4 ou 0,5 %, v/v) traduziu-se de uma forma geral num aumento do tempo de resposta para algumas estirpes. Nestes ensaios incluiram-se também estirpes de Z. bisporus, algumas das quais evidenciaram uma resposta positiva. Considera-se assim os meios desenvolvidos como diferenciais/selectivos para estas duas espécies. A validação do meio com substratos misto revelou a sua equivalência a outros meios de cultura, já descritos na literatura, no que respeita à percentagem de recuperação de Z. bailii. No entanto, a vantagem da utilização do meio de cultura desenvolvido no presente trabalho, em contraste com os restantes meios, consiste na capacidade de diferenciação de Z. bailii de outras leveduras pela cor das colónias. A análise microbiológica de duas amostras de Vinho Verde contaminado permitiu concluir, que o meio com substratos misto apresentou-se como um meio diferencial adequado para distinguir Z. bailii de outras leveduras de contaminação, com aplicação prática no controlo microbiológico de vinho e potencialmente de outras bebidas e alimentos.
Autores principais:	Schuller, Dorit Elisabeth
Ano:	1998
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Universidade do Minho
Idioma:	português
Origem:	RepositóriUM - Universidade do Minho

Descrição
Resumo:	Zygosaccharomyces bailii é uma levedura frequentemente associada a problemas de contaminação alimentar dada a sua capacidade de sobreviver em ambientes ácidos na presença de ácidos orgânicos fracos normalmente utilizados como conservantes químicos na indústria alimentar. Com vista a desenvolver um meio diferencial para Z. bailii recorreu-se a uma colecção de leveduras isoladas preferencialmente de vinhos contaminados. Assim, as estirpes seleccionadas para este estudo diferiram na sua origem e resistência a preservativos ácidos e pertenceram às espécies de Pichia membranaefaciens, Pichia anomala, Torulaspora delbrueckii, Dekkera anomala, Dekkera bruxellensis, Debaryomyces hansenii, Saccharomycodes ludwigii, Issatchenkia orientalis, Kluyveromyces marxianus, Kloeckera apiculata, Lodderomyces elongisporus, Schizosaccharomyces pombe, Rhodotorula mucilaginosa, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces bayanus, Zygosaccharomyces rouxii, Zygosaccharomyces bisporus, Zygosaccharomyces florentinus e Zygosaccharomyces bailii. O desenho do meio de cultura baseou-se na diferente capacidade de crescimento, que as diferentes espécies de levedura apresentam em meio mineral com substrato simples (ácido carboxílico fraco) ou com substratos misto (açúcar e ácido carboxílico fraco) como únicas fontes de carbono e energia. Quando os ensaios foram conduzidos num meio líquido com substrato simples, a maior parte das estirpes apresentou capacidade de utilizar pelo menos um dos vários ácidos carboxílicos testados. A natureza do ácido e a sua concentração bem como a manipulação do pH do meio, associada à incorporação de um indicador ácido-base, permitiu seleccionar condições em que somente as estirpes de Z. bailii originavam variação de cor do meio (resposta positiva). Contudo, esta resposta só foi observada após 115 a 168 h. Quando se utilizou o meio com substratos misto (glucose 0,1 %, p/v e ácido fórmico 0,3 %, v/v), em todas as estirpes de Z. bailii observou-se resposta positiva após um período de tempo consideravelmente mais reduzido (cerca de 48 h) quando comparado com o meio com substrato simples para a mesma densidade de inóculo e para as mesmas condições de incubação. Utilizando quer microplacas, quer meio sólido, procedeu-se de seguida à avaliação do comportamento deste meio com substratos misto para as outras espécies da colecção. Em ambos os casos somente as espécies de Z. bailii apresentaram resposta positiva durante as primeiras 48 h de incubação. No entanto a estirpe IGC 4194 de Z. rouxii apresentou uma resposta falso-positiva. O aumento da concentração do ácido fórmico no meio com substratos misto a pH 4,5 (glucose 0,1 %, p/v e ácido fórmico 0,4 ou 0,5 %, v/v) traduziu-se de uma forma geral num aumento do tempo de resposta para algumas estirpes. Nestes ensaios incluiram-se também estirpes de Z. bisporus, algumas das quais evidenciaram uma resposta positiva. Considera-se assim os meios desenvolvidos como diferenciais/selectivos para estas duas espécies. A validação do meio com substratos misto revelou a sua equivalência a outros meios de cultura, já descritos na literatura, no que respeita à percentagem de recuperação de Z. bailii. No entanto, a vantagem da utilização do meio de cultura desenvolvido no presente trabalho, em contraste com os restantes meios, consiste na capacidade de diferenciação de Z. bailii de outras leveduras pela cor das colónias. A análise microbiológica de duas amostras de Vinho Verde contaminado permitiu concluir, que o meio com substratos misto apresentou-se como um meio diferencial adequado para distinguir Z. bailii de outras leveduras de contaminação, com aplicação prática no controlo microbiológico de vinho e potencialmente de outras bebidas e alimentos.