Publicação
Development of a new vector for controlled gene expression in Acinetobacter baumannii
| Resumo: | A Acinetobacter baumannii é um bacilo aeróbio gram-negativo que demonstra um rápido desenvolvimento de resistência aos agentes antimicrobianos, levando ao aparecimento de muitas estirpes multirresistentes a antibióticos (MDR). Devido à resistência generalizada desta bactéria a todas as classes de antibióticos, a Organização Mundial da Saúde (OMS) classificou a A. baumannii como prioridade crítica para a pesquisa de novos antibióticos, incentivando a comunidade científica a procurar novas alternativas. Os bacteriófagos são uma alternativa para combater infeções causadas por organismos MDR. Cada fago pode codificar um arsenal de potenciais proteínas antibacterianas cuja descoberta e análise permitem o desenvolvimento de novas terapias baseadas em fagos. Devido à elevada resistência aos antibióticos da A. baumannii e às limitadas ferramentas genéticas disponíveis para estudar novas proteínas codificadas por fagos de A. baumannii com função desconhecida, mas com potencial terapêutico, construímos um vetor capaz de expressar em A. baumannii. Para controlar a expressão génica em A. baumannii, foi construído um vetor induzível com regiões promotoras de diferentes operões (lac e ara) de forma a expressar genes repórter (red fluorescent protein, green fluorescent protein). Através de diferentes métodos de validação, como a microscopia, espectrofluorimetria e géis SDS-PAGE, foi possível concluir que o promotor do operão ara expressou melhor as proteínas em A. baumannii. No entanto, a fluorescência apenas se torna significativa quando o gene repórter está com os codões otimizados. A concentração de 0,5% arabinose foi aquela que melhor induziu a expressão proteica. Em conclusão, desenvolvemos novas construções que acomodam a necessidade de análise genética deste patógeno cada vez mais importante. |
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| Autores principais: | Liberato, Valentina do Nascimento |
| Assunto: | Acinetobacter baumannii Vetor Expressão de proteínas Protein expression |
| Ano: | 2023 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade do Minho |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | RepositóriUM - Universidade do Minho |
| Resumo: | A Acinetobacter baumannii é um bacilo aeróbio gram-negativo que demonstra um rápido desenvolvimento de resistência aos agentes antimicrobianos, levando ao aparecimento de muitas estirpes multirresistentes a antibióticos (MDR). Devido à resistência generalizada desta bactéria a todas as classes de antibióticos, a Organização Mundial da Saúde (OMS) classificou a A. baumannii como prioridade crítica para a pesquisa de novos antibióticos, incentivando a comunidade científica a procurar novas alternativas. Os bacteriófagos são uma alternativa para combater infeções causadas por organismos MDR. Cada fago pode codificar um arsenal de potenciais proteínas antibacterianas cuja descoberta e análise permitem o desenvolvimento de novas terapias baseadas em fagos. Devido à elevada resistência aos antibióticos da A. baumannii e às limitadas ferramentas genéticas disponíveis para estudar novas proteínas codificadas por fagos de A. baumannii com função desconhecida, mas com potencial terapêutico, construímos um vetor capaz de expressar em A. baumannii. Para controlar a expressão génica em A. baumannii, foi construído um vetor induzível com regiões promotoras de diferentes operões (lac e ara) de forma a expressar genes repórter (red fluorescent protein, green fluorescent protein). Através de diferentes métodos de validação, como a microscopia, espectrofluorimetria e géis SDS-PAGE, foi possível concluir que o promotor do operão ara expressou melhor as proteínas em A. baumannii. No entanto, a fluorescência apenas se torna significativa quando o gene repórter está com os codões otimizados. A concentração de 0,5% arabinose foi aquela que melhor induziu a expressão proteica. Em conclusão, desenvolvemos novas construções que acomodam a necessidade de análise genética deste patógeno cada vez mais importante. |
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