Publicação
Implementação e validação de um equipamento eletrónico de contagem de células e de viabilidade celular
| Resumo: | A disponibilidade de culturas de levedura de qualidade fisiológica e microbiológica é fundamental para o processo cervejeiro. Métodos de propagação de levedura otimizados diminuem a incidência de fermentações inconsistentes e prolongadas. O crescimento de leveduras durante a propagação, fermentação e stockagem, é analisado na empresa, por dois métodos, através do Coulter Counter e do microscópio ótico. Quanto à viabilidade celular é analisada apenas no microscópio ótico. Embora o contador eletrónico de partículas seja a técnica mais usada, este não permite distinguir entre células em crescimento e células únicas, e não permite a análise da viabilidade celular, recorrendo a empresa, para este tipo de análises, ao microscópio. No entanto, os erros de contagem manual rondam os 20 % a 30 %, devido à interpretação humana. O trabalho realizado teve como principal objetivo a implementação de um contador de células automatizado, o Aber Countstar, em substituição do microscópio ótico e do Coulter Counter Instrument. Para a sua validação e implementação foi feita a contagem celular e a viabilidade celular das amostras pelo método tradicional (microscópio ótico) e pelo Coulter, e também através do novo equipamento a ser implementado. Realizaram-se ensaios para analisar a repetibilidade e a precisão do Aber, bem como para avaliar a capacidade deste de medir diferentes estirpes de levedura e de as avaliar nas várias fases do fabrico da cerveja. A posteriori, estes resultados foram analisados estatisticamente e, procedeu-se a otimizações no Aber. O trabalho realizado demonstrou que as medições no Aber são comparáveis às contagens manuais, mas também são mais repetíveis e consistentes em relação ao microscópio. No entanto, verificou-se a existência de diferenças significativas entre o Aber e o Coulter utilizando o parâmetro “Standard” no Aber. Denotou-se que existiam diferenças significativas de leitura da concentração celular, quando aplicados fatores de diluição diferentes. Estes parâmetros (Yeast Type e fator de diluição) foram otimizados de forma a equiparar as leituras entre o Aber e o Coulter, sendo encontrado um parâmetro ótimo no Aber para cada tipo de amostra a analisar, bem como o respetivo fator de diluição a aplicar. |
|---|---|
| Autores principais: | Faria, Francisca Araújo |
| Assunto: | Aber Countstar Contagem celular Contagem rápida e automatizada Levedura Viabilidade celular Cell counting Fast automated counting Yeast Cell viability |
| Ano: | 2021 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade do Minho |
| Idioma: | português |
| Origem: | RepositóriUM - Universidade do Minho |
| Resumo: | A disponibilidade de culturas de levedura de qualidade fisiológica e microbiológica é fundamental para o processo cervejeiro. Métodos de propagação de levedura otimizados diminuem a incidência de fermentações inconsistentes e prolongadas. O crescimento de leveduras durante a propagação, fermentação e stockagem, é analisado na empresa, por dois métodos, através do Coulter Counter e do microscópio ótico. Quanto à viabilidade celular é analisada apenas no microscópio ótico. Embora o contador eletrónico de partículas seja a técnica mais usada, este não permite distinguir entre células em crescimento e células únicas, e não permite a análise da viabilidade celular, recorrendo a empresa, para este tipo de análises, ao microscópio. No entanto, os erros de contagem manual rondam os 20 % a 30 %, devido à interpretação humana. O trabalho realizado teve como principal objetivo a implementação de um contador de células automatizado, o Aber Countstar, em substituição do microscópio ótico e do Coulter Counter Instrument. Para a sua validação e implementação foi feita a contagem celular e a viabilidade celular das amostras pelo método tradicional (microscópio ótico) e pelo Coulter, e também através do novo equipamento a ser implementado. Realizaram-se ensaios para analisar a repetibilidade e a precisão do Aber, bem como para avaliar a capacidade deste de medir diferentes estirpes de levedura e de as avaliar nas várias fases do fabrico da cerveja. A posteriori, estes resultados foram analisados estatisticamente e, procedeu-se a otimizações no Aber. O trabalho realizado demonstrou que as medições no Aber são comparáveis às contagens manuais, mas também são mais repetíveis e consistentes em relação ao microscópio. No entanto, verificou-se a existência de diferenças significativas entre o Aber e o Coulter utilizando o parâmetro “Standard” no Aber. Denotou-se que existiam diferenças significativas de leitura da concentração celular, quando aplicados fatores de diluição diferentes. Estes parâmetros (Yeast Type e fator de diluição) foram otimizados de forma a equiparar as leituras entre o Aber e o Coulter, sendo encontrado um parâmetro ótimo no Aber para cada tipo de amostra a analisar, bem como o respetivo fator de diluição a aplicar. |
|---|