Publicação

Efeito da refeição sanguínea, anticorpos e infecções mistas no desenvolvimento esporogónico de Plasmodium spp.

Detalhes bibliográficos
Resumo:	A transmissão de Plasmodium ao mosquito e o seu desenvolvimento esporogónico são alvos importantes para o desenvolvimento de métodos de controlo de transmissão. Nesta fase do ciclo de vida, o parasita enfrenta condições muito adversas derivadas do mosquito e da própria refeição sanguínea. É nesta altura que se observam as maiores reduções do número de parasitas e como tal a manipulação artificial destas condições poderia levar a uma redução significativa da transmissão. Vários factores da refeição sanguínea tais como anticorpos, fármacos, refeições múltiplas ou presença de várias estirpes ou espécies de parasitas, podem diminuir ou pelo contrário potenciar a transmissão. Além disso, o ambiente no intestino médio é adverso devido à digestão da refeição sanguínea e a uma resposta imunológica eficaz produzida pelo mosquito contra o parasita. Várias linhas experimentais foram seguidas no sentido de contribuir para o entendimento da forma como alguns destes factores afectam o desenvolvimento do parasita. Estudou-se o efeito de uma segunda alimentação sanguínea e de soro de Rattus rattus e de Mus musculus (BALB/c) contendo anticorpos anti-esporozoíto de Plasmodium yoelii yoelii, na taxa e na intensidade de infecção em mosquitos Anopheles stephensi. Foram ainda avaliadas alterações na expressão de genes do parasita e do mosquito, pelo método de DDRT-PCR e os resultados confirmados por qRT-PCR. A taxa e a intensidade de infecção foram reduzidas de forma significativa quando os mosquitos foram alimentados com soro imune. Foram também identificados, por DDRT-PCR, dois genes de P. yoelii yoelii e oito de A. stephensi, cuja expressão foi alterada pela segunda alimentação sanguínea e/ou pelo tratamento com soro imune. Quando a expressão foi analisada por qRT-PCR observaram-se diferenças estatisticamente significativas, na expressão de alguns genes nos diferentes grupos de tratamento. No decurso deste trabalho foi testado um método para a cultura de oocinetos de Plasmodium falciparum. Embora se tenham obtido oocinetos, o seu número era insuficiente para utilização em experiências subsequentes e o método não foi implementado. Para determinar o impacto de uma infecção mista no desenvolvimento parasitário no mosquito foram realizadas infecções experimentais com P. falciparum e/ou Plasmodium vivax. Mosquitos Anopheles albimanus, foram infectados por alimentação artificial de membrana, com sangue de doentes infectados com apenas uma das espécies. A realização de infecções experimentais e recolha de material biológico foi feita em Buenaventura e Cali, na Colômbia. Analisou-se a dinâmica de infecção nos mosquitos, assim como a resposta de alguns genes do seu sistema imunológico a infecções simples e mistas, com ambas as espécies. Os resultados obtidos para a dinâmica de infecções não mostrou nenhum efeito evidente de uma espécie sobre a outra, no entanto tratou-se de um estudo preliminar. Verificou-se que alguns dos genes estudados parecem responder à infecção e foram também observados padrões de expressão diferentes de acordo com o tipo de infecção. Observou-se o aumento de expressão de alguns genes, sendo mais evidente no corpo gordo, especialmente na altura de libertação de esporozoítos do oocisto. No intestino médio, a cecropina 3 foi o gene cuja expressão foi mais alterada, verificando-se um aumento de expressão às 24 horas, altura em que se dá a invasão do epitélio pelos oocinetos. Alguns dos factores analisados mostraram ter um efeito no desenvolvimento esporogónico de Plasmodium, podendo esse efeito ser directo no parasita ou indirecto afectando a resposta do mosquito à infecção. Verificaram-se alterações na expressão génica quer em Plasmodium quer em Anopheles como resposta às diferentes variantes experimentais mas estudos mais específicos são necessários para aferir os mecanismos moleculares subjacentes aos efeitos observados e o seu impacto em medidas de controlo da malária.
Autores principais:	LOPES, Luís Filipe Vieira da Silva
Assunto:	Malária Parasitologia Plasmodium spp Ciclos de vida Vectores
Ano:	2008
País:	Portugal
Tipo de documento:	tese de doutoramento
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Universidade Nova de Lisboa
Idioma:	português
Origem:	Repositório Institucional da UNL

Descrição
Resumo:	A transmissão de Plasmodium ao mosquito e o seu desenvolvimento esporogónico são alvos importantes para o desenvolvimento de métodos de controlo de transmissão. Nesta fase do ciclo de vida, o parasita enfrenta condições muito adversas derivadas do mosquito e da própria refeição sanguínea. É nesta altura que se observam as maiores reduções do número de parasitas e como tal a manipulação artificial destas condições poderia levar a uma redução significativa da transmissão. Vários factores da refeição sanguínea tais como anticorpos, fármacos, refeições múltiplas ou presença de várias estirpes ou espécies de parasitas, podem diminuir ou pelo contrário potenciar a transmissão. Além disso, o ambiente no intestino médio é adverso devido à digestão da refeição sanguínea e a uma resposta imunológica eficaz produzida pelo mosquito contra o parasita. Várias linhas experimentais foram seguidas no sentido de contribuir para o entendimento da forma como alguns destes factores afectam o desenvolvimento do parasita. Estudou-se o efeito de uma segunda alimentação sanguínea e de soro de Rattus rattus e de Mus musculus (BALB/c) contendo anticorpos anti-esporozoíto de Plasmodium yoelii yoelii, na taxa e na intensidade de infecção em mosquitos Anopheles stephensi. Foram ainda avaliadas alterações na expressão de genes do parasita e do mosquito, pelo método de DDRT-PCR e os resultados confirmados por qRT-PCR. A taxa e a intensidade de infecção foram reduzidas de forma significativa quando os mosquitos foram alimentados com soro imune. Foram também identificados, por DDRT-PCR, dois genes de P. yoelii yoelii e oito de A. stephensi, cuja expressão foi alterada pela segunda alimentação sanguínea e/ou pelo tratamento com soro imune. Quando a expressão foi analisada por qRT-PCR observaram-se diferenças estatisticamente significativas, na expressão de alguns genes nos diferentes grupos de tratamento. No decurso deste trabalho foi testado um método para a cultura de oocinetos de Plasmodium falciparum. Embora se tenham obtido oocinetos, o seu número era insuficiente para utilização em experiências subsequentes e o método não foi implementado. Para determinar o impacto de uma infecção mista no desenvolvimento parasitário no mosquito foram realizadas infecções experimentais com P. falciparum e/ou Plasmodium vivax. Mosquitos Anopheles albimanus, foram infectados por alimentação artificial de membrana, com sangue de doentes infectados com apenas uma das espécies. A realização de infecções experimentais e recolha de material biológico foi feita em Buenaventura e Cali, na Colômbia. Analisou-se a dinâmica de infecção nos mosquitos, assim como a resposta de alguns genes do seu sistema imunológico a infecções simples e mistas, com ambas as espécies. Os resultados obtidos para a dinâmica de infecções não mostrou nenhum efeito evidente de uma espécie sobre a outra, no entanto tratou-se de um estudo preliminar. Verificou-se que alguns dos genes estudados parecem responder à infecção e foram também observados padrões de expressão diferentes de acordo com o tipo de infecção. Observou-se o aumento de expressão de alguns genes, sendo mais evidente no corpo gordo, especialmente na altura de libertação de esporozoítos do oocisto. No intestino médio, a cecropina 3 foi o gene cuja expressão foi mais alterada, verificando-se um aumento de expressão às 24 horas, altura em que se dá a invasão do epitélio pelos oocinetos. Alguns dos factores analisados mostraram ter um efeito no desenvolvimento esporogónico de Plasmodium, podendo esse efeito ser directo no parasita ou indirecto afectando a resposta do mosquito à infecção. Verificaram-se alterações na expressão génica quer em Plasmodium quer em Anopheles como resposta às diferentes variantes experimentais mas estudos mais específicos são necessários para aferir os mecanismos moleculares subjacentes aos efeitos observados e o seu impacto em medidas de controlo da malária.