Publicação
Establishing an optimized experimental framework to model the multiple myeloma microenvironment for targeted drug screening
| Resumo: | Resumo: O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia das células plasmáticas (PC), resultante da expansão clonal destas células na medula óssea (BM). O estabelecimento de sistemas ex vivo que reflitam de forma fidedigna este microambiente é crucial para o desenvolvimento de novas terapias. Este trabalho teve como objetivo criar uma estrutura experimental otimizada, capaz de manter células derivadas da BM de doentes em cultura de curta duração, permitindo o estudo dos efeitos de fármacos no microambiente do MM. A investigação teve início com experiências de co-culturas utilizando a linha celular MM1R e células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de doadores saudáveis, avaliadas em condições 2D e 3D Matrigel® por 72h. As PBMCs demonstraram boa viabilidade geral, enquanto as células MM1R apresentaram declínio consistente na viabilidade após 24h em cultura. BM estabeleceu que 200.000 eventos eram necessários para preservar as proporções populacionais, garantindo, ao mesmo tempo, pelo menos 20 eventos por subconjunto. Com base nesse padrão, três modelos foram comparados: modelo 2D, modelo Matrigel 3D e o modelo 3DTEBM, sob diferentes condições. Entre estes, o 3DTEBM a uma concentração de 1 x 106 células/mL proporcionou a maior viabilidade geral, mantendo também a capacidade proliferativa por até 48h. Por fim, um painel otimizado de citometria de fluxo foi cuidadosamente desenvolvido, incluindo titulações de anticorpos para garantir a identificação fiável de populações imunes importantes. Em conjunto, este projeto estabelece um fluxo de trabalho sólido baseado em 3DTEBM para cultura de curto prazo de amostras de pacientes com MM, criando uma base para futuras aplicações de testes de fármacos num microambiente clinicamente relevante. |
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| Autores principais: | Silva, Madalena |
| Assunto: | Multiple myeloma Bone narrow Bone marrow microenvironment Cell culture Flow cytometry Drug tests |
| Ano: | 2026 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade Nova de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório Institucional da UNL |
| Resumo: | Resumo: O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia das células plasmáticas (PC), resultante da expansão clonal destas células na medula óssea (BM). O estabelecimento de sistemas ex vivo que reflitam de forma fidedigna este microambiente é crucial para o desenvolvimento de novas terapias. Este trabalho teve como objetivo criar uma estrutura experimental otimizada, capaz de manter células derivadas da BM de doentes em cultura de curta duração, permitindo o estudo dos efeitos de fármacos no microambiente do MM. A investigação teve início com experiências de co-culturas utilizando a linha celular MM1R e células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de doadores saudáveis, avaliadas em condições 2D e 3D Matrigel® por 72h. As PBMCs demonstraram boa viabilidade geral, enquanto as células MM1R apresentaram declínio consistente na viabilidade após 24h em cultura. BM estabeleceu que 200.000 eventos eram necessários para preservar as proporções populacionais, garantindo, ao mesmo tempo, pelo menos 20 eventos por subconjunto. Com base nesse padrão, três modelos foram comparados: modelo 2D, modelo Matrigel 3D e o modelo 3DTEBM, sob diferentes condições. Entre estes, o 3DTEBM a uma concentração de 1 x 106 células/mL proporcionou a maior viabilidade geral, mantendo também a capacidade proliferativa por até 48h. Por fim, um painel otimizado de citometria de fluxo foi cuidadosamente desenvolvido, incluindo titulações de anticorpos para garantir a identificação fiável de populações imunes importantes. Em conjunto, este projeto estabelece um fluxo de trabalho sólido baseado em 3DTEBM para cultura de curto prazo de amostras de pacientes com MM, criando uma base para futuras aplicações de testes de fármacos num microambiente clinicamente relevante. |
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