Publicação

Evaluation of sCD40L in heart regeneration after cryoinjury-induced myocardial infarction in zebrafish: methodological approach

Detalhes bibliográficos
Resumo:	O enfarte agudo do miocárdio, ou ataque cardíaco, constitui uma das maiores causas de mortalidade e morbilidade no ser humano. De um modo geral, o enfarte tem como origem uma obstrução das artérias coronárias, em consequência da qual o tecido a jusante fica em isquemia, havendo necrose do mesmo. Como o coração humano é incapaz de regeneração, o miocárdio afectado cicatriza, num processo que envolve inflamação e reparação, o que origina a perda de contractilidade do miocárdio, podendo levar a insuficiência cardíaca. O peixe-zebra (Danio rerio) não possui a limitação do potencial regenerativo, referida anteriormente, tendo já sido evidenciada a capacidade regenerativa de até 25% do ventrículo criocauterizado. Este organismo é um modelo adequado para estudos de desenvolvimento cardíaco e doenças humanas relacionadas, já que detém uma homologia com o ser humano na programação da expressão génica essencial, bem como na actividade eléctrica do coração. Estudos anteriores do grupo de investigação onde esta tese foi realizada mostram níveis do ligando solúvel de CD40 (sCD40L), uma glicoproteína transmembranar, em pacientes de enfarte agudo do miocárdio está associado a disfunção endotelial persistente e a reparação cardíaca pós-enfarte comprometida. A associação da sCD40L à reparação e remodelação do miocárdio pós-enfarte não foi ainda explorada, pelo que é um tópico que carece de esclarecimentos. Para tal, estudos usando o modelo de peixe-zebra são necessários de forma a compreender os mecanismos associados ao papel de sCD40L na recuperação cardíaca após o enfarte do miocárdio. Assim, o objectivo principal deste projecto foi a implementação de protocolos que permitiram avaliar o papel do sCD40L na regeneração do miocárdio de peixe-zebra após enfarte agudo do miocárdio induzido por uma sonda a frio. Para atingir o objectivo, foram estabelecidos vários protocolos como a criolesão, a colheita de sangue, metodologias histológicas e de microscopia. O projecto também visou a implementação do protocolo de um Modelo de Regeneração Comprometida, contribuindo para o objectivo principal proposto. Prospectivamente, esta dissertação pode contribuir para estudos futuros em peixe-zebra, que porventura providenciarão translação para investigação clínica envolvendo reparação cardíaca pós-enfarte, em pacientes humanos. Para cumprir o objectivo proposto, os peixes-zebra adultos, foram sujeitos a criolesão de modo a induzir um enfarte do miocárdio e, por conseguinte, monitorizados em vários pontos temporais. Um modelo de regeneração comprometida foi também estudado, através da administração de glucocorticóides imunossupressores aos peixes. A sCD40L foi avaliada no sangue recorrendo a Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Técnicas de histologia e microscopia de campo claro e Light sheet foram comparadas. A microscopia de fluorescência Light Sheet foi usada para comparação histológica do tecido cardíaco de diferentes linhas transgénicas e entre modelos de regeneração. Com o presente trabalho, foram estabelecidas as metodologias inovadoras propostas, não implementadas anteriormente no Instituto de Medicina Molecular (iMM). Obtiveram-se também resultados preliminares que demonstram diferenças na morfologia do enfarte entre modelos de reparação bem como concentrações elevadas de sCD40L no modelo de reparação cardíaca exposto a imunossupressores.
Autores principais:	Eugénio, Patrícia Raquel dos Anjos
Assunto:	Regeneração Peixe-zebra Inflamação Teses de mestrado - 2016
Ano:	2016
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Universidade de Lisboa
Idioma:	inglês
Origem:	Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição
Resumo:	O enfarte agudo do miocárdio, ou ataque cardíaco, constitui uma das maiores causas de mortalidade e morbilidade no ser humano. De um modo geral, o enfarte tem como origem uma obstrução das artérias coronárias, em consequência da qual o tecido a jusante fica em isquemia, havendo necrose do mesmo. Como o coração humano é incapaz de regeneração, o miocárdio afectado cicatriza, num processo que envolve inflamação e reparação, o que origina a perda de contractilidade do miocárdio, podendo levar a insuficiência cardíaca. O peixe-zebra (Danio rerio) não possui a limitação do potencial regenerativo, referida anteriormente, tendo já sido evidenciada a capacidade regenerativa de até 25% do ventrículo criocauterizado. Este organismo é um modelo adequado para estudos de desenvolvimento cardíaco e doenças humanas relacionadas, já que detém uma homologia com o ser humano na programação da expressão génica essencial, bem como na actividade eléctrica do coração. Estudos anteriores do grupo de investigação onde esta tese foi realizada mostram níveis do ligando solúvel de CD40 (sCD40L), uma glicoproteína transmembranar, em pacientes de enfarte agudo do miocárdio está associado a disfunção endotelial persistente e a reparação cardíaca pós-enfarte comprometida. A associação da sCD40L à reparação e remodelação do miocárdio pós-enfarte não foi ainda explorada, pelo que é um tópico que carece de esclarecimentos. Para tal, estudos usando o modelo de peixe-zebra são necessários de forma a compreender os mecanismos associados ao papel de sCD40L na recuperação cardíaca após o enfarte do miocárdio. Assim, o objectivo principal deste projecto foi a implementação de protocolos que permitiram avaliar o papel do sCD40L na regeneração do miocárdio de peixe-zebra após enfarte agudo do miocárdio induzido por uma sonda a frio. Para atingir o objectivo, foram estabelecidos vários protocolos como a criolesão, a colheita de sangue, metodologias histológicas e de microscopia. O projecto também visou a implementação do protocolo de um Modelo de Regeneração Comprometida, contribuindo para o objectivo principal proposto. Prospectivamente, esta dissertação pode contribuir para estudos futuros em peixe-zebra, que porventura providenciarão translação para investigação clínica envolvendo reparação cardíaca pós-enfarte, em pacientes humanos. Para cumprir o objectivo proposto, os peixes-zebra adultos, foram sujeitos a criolesão de modo a induzir um enfarte do miocárdio e, por conseguinte, monitorizados em vários pontos temporais. Um modelo de regeneração comprometida foi também estudado, através da administração de glucocorticóides imunossupressores aos peixes. A sCD40L foi avaliada no sangue recorrendo a Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Técnicas de histologia e microscopia de campo claro e Light sheet foram comparadas. A microscopia de fluorescência Light Sheet foi usada para comparação histológica do tecido cardíaco de diferentes linhas transgénicas e entre modelos de regeneração. Com o presente trabalho, foram estabelecidas as metodologias inovadoras propostas, não implementadas anteriormente no Instituto de Medicina Molecular (iMM). Obtiveram-se também resultados preliminares que demonstram diferenças na morfologia do enfarte entre modelos de reparação bem como concentrações elevadas de sCD40L no modelo de reparação cardíaca exposto a imunossupressores.